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实验目的1.探讨食管鳞癌中LSD1与m TOR通路相互调控关系。2.探讨LSD1抑制剂对食管鳞癌细胞株增殖作用及其分子作用机制,为食管鳞癌的分子靶向治疗提供理论基础。实验方法1.不同食管鳞癌细胞株中LSD1与m TOR通路相关蛋白表达情况。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测不同食管鳞癌细胞株中LSD1及m TOR通路相关蛋白PTEN、p-AKT(ser473)、p-P70S6K、Rictor、Raptor的表达水平。2.LSD1抑制剂对食管鳞癌细胞株TE-1、ECa109细胞增殖的影响。CCK-8法检测LSD1抑制剂处理TE-1、ECa109细胞48h后细胞的增殖变化情况。3.抑制LSD1对mTOR通路相关蛋白和组蛋白表达的影响。用LSD1抑制剂分别处理食管鳞癌细胞株TE-1、ECa109 48h后,Western blot法检测LSD1、PTEN、p-P70S6K及组蛋白H3K4me2的表达水平;用sh RNA-LSD1干扰ECa109细胞中LSD1的表达水平,Western blot法检测检测LSD1、PTEN、Rictor、Raptor、p-p70S6K的表达水平。4.抑制m TOR通路对LSD1的影响。用m TORC1特异性抑制剂雷帕霉素以及ATP竞争性m TORC1/m TORC2双重抑制剂PP242分别处理ECa109细胞,Western blot法检测不同浓度的PP242(0,1,5,10μM)、雷帕霉素(0,50,100,200n M)作用24h后对食管鳞癌细胞ECa109中LSD1、Rictor、Raptor及p-p70S6K等蛋白表达的影响。实验结果1.所选五株食管鳞癌细胞TE-1、ECa109、KYSE450、KYSE750、EC9706均检测到LSD1表达,且LSD1表达存在差异,在ECa109细胞中LSD1表达较高。2.LSD1抑制剂处理后,TE-1、ECa109细胞增殖活力明显减低,并且m TORC1及m TORC2通路相关蛋白表达水平降低;LSD1的表达没有变化,而其底物H3K4的双甲基化水平升高。运用sh RNA-LSD1干扰ECa109细胞中LSD1的表达后m TORC1,m TORC2通路相关蛋白表达水平降低。3.用雷帕霉素以及PP242分别处理ECa109细胞后均检测到LSD1表达水平降低。结论1.LSD1在五株不同食管鳞癌细胞TE-1、ECa109、KYSE450、KYSE750、EC9706中呈激活状态,但激活程度不同。2.LSD1抑制剂对食管鳞癌细胞株TE-1、ECa109有增殖抑制作用。3.食管鳞癌中LSD1与mTOR通路之间存在相互调控作用。LSD1的抑制可以抑制m TOR通路的活性,同时m TOR的抑制也可以抑制LSD1的表达。