基于胶体金免疫层析法的食源性致病菌检测技术的研究

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近年来,全球及我国接连不断发生的食源性病原微生物引起的食品安全事故频频发生,其中,由大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等致病菌引起的感染最为常见。在诊断方面,目前广泛使用的食源性病原微生物检测方法存在检测时间长,过程繁琐,需要大型仪器来辅助,不利于现场的快速检测,对操作人员技术要求高以及对特定血清型难以分离鉴定的问题。因此,建立研究食源性致病菌的快速检测方法就显得尤为重要。胶体金免疫层析法是一种将纳米技术、胶体金标记、免疫反应和色层分析法等多种方法结合在一起的固相免疫检测技术,它具有灵敏、便捷、安全、快速、成本低等特点。本课题主要研究基于胶体金免疫层析法的食源性致病菌检测技术。1)以胶体金免疫层析法为基础制备金黄色葡萄球菌快速检测卡。本实验对检测卡制备过程中的胶体金制备条件、胶体金标记的最佳pH值、胶体金标记的最适蛋白量、胶体金稀释液等配方进行了探索,阐述了采用胶体金免疫层析法制金黄色葡萄球菌快速检测卡的制备方法;并且对制得的金黄色葡萄球菌快速检测卡进行全面的性能测验与评估。测试结果表明,该检测卡的灵敏度在103CFU/mL,特异性、重现性良好,检测卡在常温下保质期为12个月,4oC条件下保质期为24个月。2)金黄色葡萄球菌快速检测卡在检测食品中金黄色葡萄球菌的应用。人工模拟被金黄色葡萄球菌污染的食品样品,然后利用上述金黄色葡萄球菌快速检测卡检测;同时将上述食品样品用ELISA方法检测,其结果作为对照,根据检测结果估算试纸条的检出率为98.7%。本实验制得的金黄色葡萄球菌快速检测卡在食品安全检测方面有很好的实用价值。3)制备大肠杆菌O157:H7快速检测卡。本实验对大肠杆菌O157:H7快速检测卡的制备配方进行了摸索,阐述了采用胶体金免疫层析法制大肠杆菌O157:H7快速检测卡的制备方法;并且对制得的快速检测大肠杆菌O157:H7的胶体金免疫层析试纸条进行性能测验与评估。测试结果表明,该检测卡的灵敏度在104CFU/mL,特异性、重现性良好,检测卡在常温下保质期为12个月,4oC条件下保质期为24个月。
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