目的:随着基因测序技术以及生物信息技术的发展,非编码RNA的重要作用逐渐被我们发现,mi RNA作为非编码基因的一员参与了人类细胞的各个生命活动环节,对人类的诸多疾病发挥调节作用,在肿瘤的发生发展中亦是发挥了重要作用。结直肠癌是目前危害人类健康的重大疾病,是全球最常见的恶性肿瘤之一,研究显示mi RNA在结直肠癌的发生、转移、侵袭、治疗、预后等各个方面均有不可忽视的意义,现有研究显示mi R-30a-5p在肺癌、乳腺癌、卵巢癌等肿瘤中均存在异常表达,能够在转录后水平调节肿瘤细胞的各种病理生理过程。本研究旨在研究mi R-30a-5p在结直肠癌中的表达及意义,以期进一步阐释结直肠癌的发生发展机制,为结直肠癌的治疗及预后提供新的有潜力的靶点。方法:首先,在收集到的20组患者结直肠癌组织及其对应癌旁组织标本中,利用q PT-PCR技术我们测定了mi R-30a-5p的含量水平。其次,在正常肠上皮细胞系NCM460以及结直肠癌细胞系DLD1、HCT116、SW620中,利用q PT-PCR技术检测了mi R-30a-5p的含量水平。并筛选出差异表达最大的DLD1细胞系进行进一步的实验。第三,通过细胞转染及数在DLD1细胞中构建mi R-30a-5p过表达模型,进行细胞功能学实验,CCK8检测细胞的增殖能力;平板克隆实验检测细胞的克隆形成能力;平板划痕以及Transwell侵袭实验检测细胞的侵袭能力。第四,通过生物信息学软件预测mi R-30a-5p的下游作用靶点,在临床样本及细胞中验证其表达。最后,在建立的mi R-30a-5p过表达模型中通过转染技术恢复KRAS基因的表达,通过第三部分相同的细胞功能学实验观察细胞的生物学功能能否得到逆转,从而反向印证mi R-30a-5p与KRAS基因的相互作用关系。实验原始数据采用SPSS 22.0,Graph Pad 7.0进行统计分析及处理,数据以MEAN±SD形式表示,组间差异以t检验进行分析,*代表P<0.05,**代表P<0.01,P<0.05视为有统计学意义。结果:1.mi R-30a-5p在结直肠癌组织结直肠癌细胞系中的含量降低与对应癌旁组织相比,结直肠癌组织中的mi R-30a-5p含量显著下调。与正常肠上皮细胞株NCM460相比,结直肠癌细胞株DLD1、SW620、HCT116中mi R-30a-5p的表达含量显著下降,p<0.05,差异具有统计学意义,其中DLD1中mi R-30a-5p的表达差异最大,表明mi R-30a-5p在结直肠癌组织及细胞系中的含量存在异常降低。2.mi R-30a-5p过表达能够抑制结直肠癌细胞的增殖、克隆形成及侵袭能力在转染了mi R-30a-5p mimic的DLD1细胞中,我们成功的构建了mi R-30a-5p过表达模型,在该模型中进行的细胞功能学检测结果提示,mi R-30a-5p过表达能够抑制结直肠癌细胞的增殖、克隆形成及侵袭能力。3.KRAS是mi R-30a-5p的下游靶基因通过Target Scan、mi RDB以及mi Randa三个数据库我们预测到KRAS基因是mi R-30a-5p的下游靶基因。q RT-PCR结果显示KRAS m RNA在结直肠癌组织的表达趋势与mi R-30a-5p相反,表明KRAS基因的表达可能直接受到mi R-30a-5p的调控。4.恢复mi R-30a-5p过表达模型中的KRAS表达水平,能够显著逆转mi R-30a-5p过表达对细胞功能的抑制作用。通过在成功构建的mi R-30a-5p过表达模型中转染pc DNA3.1-KRAS质粒,我们成功的上调了mi R-30a-5p过表达模型中的KRAS表达含量,并且通过细胞功能学实验印证了上调KRAS的表达能够显著逆转mi R-30a-5p过表达对结直肠癌细胞的增殖、克隆形成及侵袭能力的抑制。至此我们在体外细胞水平验证了,mi R-30a-5p通过负调控KRAS基因的表达抑制结直肠癌恶性表型的关键作用。结论:1、mi R-30a-5p在结直肠癌组织及结直肠癌细胞系中均存在低表达,表明mi R-30a-5p可能是一种对结直肠癌有抑癌作用的分子;2、KRAS是mi R-30a-5p的下游靶基因,结直肠癌组织中的KRAS基因表达水平与mi R-30a-5p的表达水平趋势相反;3、上调结直肠癌细胞DLD1中mi R-30a-5p的表达水平,能够显著抑制结直肠癌细胞的增殖、克隆形成及迁移能力,上述实验结果可以通过上调KRAS的表达逆转,表明mi R-30a-5p是一种有抑癌作用的分子,且与KRAS基因存在负调控。