论文部分内容阅读
本研究利用蛹虫草菌对东革阿里进行双向发酵,探索提高木质化程度较高类药材药效的新途径。在采用单因素法确定蛹虫草菌液体发酵条件的基础上,通过响应面分析法进一步优化蛹虫草菌液体发酵条件;通过正交实验确定蛹虫草菌和东革阿里双向发酵的最优条件,并检测发酵液中纤维素酶的酶活;对发酵产物和东革阿里提取物的抑菌性和抗氧化性对比分析。主要结果如下:以胞外多糖浓度和菌丝体生物量为指标,在温度为25℃,摇床转速为120 r·min-1的条件下,对三种培养基进行筛选,最终选择2号培养基-半合成培养基为最佳液体培养基。分别以发酵温度,摇床转速,起始p H为影响因素,通过单因素法确定蛹虫草菌液体发酵条件为:发酵温度25℃,起始p H 6.0,摇床转速120 r·min-1。为了优化蛹虫草菌液体发酵条件,采用响应面分析法最终确定蛹虫草菌液体发酵最优条件为温度25.09℃、起始p H 6.24、摇床转速为124.5 r·min-1,此时目标产物菌丝体生物量达到9.58g·L-1、胞外多糖浓度达到2.52 g·L-1。利用正交实验法优化蛹虫草菌双向发酵东革阿里的条件,当以菌丝体生物量为目标产物时,最优发酵温度为26℃、起始p H为6.0、摇床转速为120 r·min-1、东革阿里添加量为1%;当以东革阿里减少率为目标时,最适的发酵温度为26℃、起始p H为6.0、摇床转速为120 r·min-1、东革阿里添加量为2%。采用DNS法测定发酵液上清液纤维素酶酶活,测得发酵液中β-葡萄糖苷酶的酶活为1.16 U·mg-1;随着蛹虫草菌双向发酵东革阿里,东革阿里的质量从1.50 g减少到1.19g,减少率为20.56%;发酵前后的显微观察结果表明,东革阿里基质结构发生了变化,出现了空洞等现象。结果提示蛹虫草菌通过液体发酵可以转化利用东革阿里基质。分别以金黄色葡萄球菌,藤黄八叠球菌和大肠杆菌为指示菌,对东革阿里提取物和蛹虫草菌液体双向发酵东革阿里发酵液的抑菌性进行检测,结果显示蛹虫草菌液体发酵的抑菌性强于蛹虫草菌双向发酵东革阿里,蛹虫草菌双向发酵东革阿里的抑菌性要强于东革阿里提取物。以发酵液多糖质量浓度为梯度,检测双向发酵液的抗氧化性。结果表明蛹虫草菌双向发酵东革阿里发酵液具有一定的还原能力。发酵液对DPPH自由基的清除率和对羟基自由基的清除率均与发酵液多糖质量浓度正相关,其中发酵液多糖浓度的IC50分别为117.81 mg·L-1和358.56 mg·L-1。本研究通过蛹虫草菌液体双向发酵东革阿里,降低生产成本,提高生产效率,为今后规模化生产功能性发酵饮品提供了理论基础;同时,扩展了利用药用真菌发酵木质化程度高类药材的方向,为中药材活性成分结构修饰提供新途径,对于提高中药材药效,逐步实现中药材发酵现代化有着实际价值。