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研究背景RNA 结合蛋白 Noval(neuro-oncological ventral antigen 1)是神经特异性剪接因子。随着研究的深入,人们发现Noval对肿瘤预后、能量代谢也有影响,并在脂肪组织也具有较高的表达。我们的前期研究发现,脂肪来源的间充质干细胞(Adipose Tissue-Derived stem cells,ADSCs)成脂分化的过程中NOVA1基因表达升高,敲减NOVA1能够抑制脂肪分化。本研究将进一步探讨在ADSCs成脂分化过程中NOVA1的激活机制及其促进脂肪分化的机制。研究目的1.探讨脂肪特异转录因子对NOVA1的转录调控作用。2.发现Nova1调控成脂分化的靶分子。研究方法和结果1.脂肪特异转录因子对NOVA1的转录调控作用。方法:双萤光报告检测脂肪特异转录因子对NOVA1启动子的转录调控作用,染色质免疫共沉淀(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP)检测 ADSCs 中 PPARy在NOVA1启动子的富集,实时定量PCR检测在ADSCs中过表达或激活PPARγ对NOVA1表达的调控。结果:PPARγ:RXRa转录因子复合物通过识别PPARγ应答元件(Peroxisome Prolifertors Responsive Element,PPRE)转录激活NOVA1启动子;PPARy在NOVA1启动子区PPRE附近有显著富集;激活或过表达PPARγ后NOVA1的表达升高,PPARγ拮抗剂和抑制态PPARy能够逆转NOVA1的表达升高。2.Nova1调控脂肪分化的靶分子。方法:全转录组表达谱芯片、生物信息学分析和实时定量PCR筛选出Noval调控的脂肪特异基因;敲减靶基因并成脂诱导,油红O和实时定量PCR检测对脂肪分化的影响;敲减NOVA1的基础上过表达靶基因,成脂诱导后油红O和实时定量PCR检测对脂肪分化的影响。结果:Noval能影响PPARy下游基因ACSL1、CD36、FASN、PLIN1的表达;敲减CD36、FASN、PLIN1都能抑制脂肪分化;过表达FASN或PLIN1都能够部分挽救敲减NOVA1对脂肪分化抑制作用。研究结论1.PPARγ:RXRα转录因子复合物促进NOVA1基因的转录。2.Nova1通过影响FASN、PLIN1基因的表达调控ADSCs成脂分化。