广西黑鸡禽白血病的净化与病毒株全基因组序列分析

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禽白血病(Avian leukosis, AL)是由禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)引起的一种免疫抑制性肿瘤病。ALV的自然宿主主要是鸡,其发病率和死亡率都较低,但是鸡群感染ALV后会造成生产性能下降,给养禽业来带来巨大的经济损失;目前,防控AL的方法是对鸡群进行净化。广西黑鸡是广西地区养殖规模较大的一个优良品种,本课题选择广西DGGX4和DGGX11两个养殖公司的黑鸡育种群开展AL的净化和相关的研究。研究内容一,对DGGX4和DGGX11两公司黑鸡育种鸡群开展AL的净化工作。应用IDEXX公司商品化ALV p27抗原、A/B和J抗体ELISA检测试剂盒,对两公司黑鸡的肛拭/血浆(公鸡)/蛋清(母鸡)/血清样品进行检测,淘汰抗原和抗体阳性的鸡只,阴性留种。经过三个世代的净化,DGGX4公司黑鸡育种群p27抗原的阳性率由原来的12.4%下降到了0.52%,A/B和J抗体阳性率均为0%,净化效果显著;经过四个世代的净化,DGGX11公司黑鸡育种群p27抗原的阳性率由原来的7.71%下降到了2.92%,第三世代时,J和A/B抗体的总阳性率分别为7.61%和15.76%,净化效果良好。研究内容二,采集DGGX4和DGGX11公司第二世代p27抗原阳性鸡只的血清或血浆,接种DF-1细胞,进行ALV的分离和鉴定,并采用分子克隆测序的相关方法,拟对分离株进行核酸全基因组测序,再与国内外参考株进行同源性分析。研究结果表明:DGGX4和DGGX11公司的黑鸡存在ALV病毒的感染,并从黑鸡中成功分离并鉴定出2株ALV-J,分别命名为GXD2和GXH3;同源性分析结果显示,GXD2和GXH3两毒株gp85和gp37的氨基酸同源性高达99%以上,与蛋鸡参考株SD07LK1的遗传距离较近;与参考株的同源性分析结果显示,全基因组的同源性在93.7%以上;gag和pol基因相当保守,同源性在94%以上;UTR区的变异较大,3’UTR的变异比5’UTR大;两毒株都有完整的E元件。研究结果表明:广西黑鸡前期的净化取得了良好的效果,净化方法可行。同时,成功从黑鸡中分离到了两株ALV-J,且首次完成了广西ALV-J分离株核酸全基因组序列的测定和分析。
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