产甲壳素酶菌株的筛选、发酵条件优化和酶学性质研究

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甲壳素又被称为几丁质,甲壳素是N-乙酰氨基葡萄糖以β-1,4糖苷键聚合而成,是数量上第二大的自然聚合物,每年由生物产生的甲壳素总量十分巨大,据估约有一百亿吨。虽然甲壳素开发价值与前景很大,但是甲壳素中广泛存在的氢键使得它的性质十分稳定,它不溶于一般的酸、碱和许多有机溶剂,这一性质使得它的应用十分困难。甲壳素酶是能够催化连接N-乙酰-D葡糖胺的糖苷键断裂的酶类,可降解甲壳素为甲壳寡糖或者N-乙酰氨基葡糖。酶解法降解甲壳素工艺简单、反应条件温和、环境友好,有很高的研究价值。本研究经初筛、复筛得到一株产甲壳素酶的菌株。通过对该菌株发酵条件进行研究,其最优培养基组分为:粉末甲壳素0.5%、2%酵母浸粉、硫酸铵0.5%、硫酸镁0.15%、NaCl1%,K2HPO40.07%,KH2PO40.03%;最适条件为接种量3%、装液量100ml/250ml,起始pH6.0,摇床转速140rpm,培养温度30℃。在最适条件下发酵培养该菌株,发酵液离心、硫酸铵盐析、透析、冷冻干燥得到甲壳素粗酶,并对粗酶酶学性质进行了初步研究。研究发现最适温度45℃,25℃至45℃保温较长时间具有稳定性;酶的最适pH为6,pH5.5~7.5范围内,该酶的稳定性较好;Mg2+和Zn2+对酶活性有促进作用, Cu2+、Fe3+、Ca2+对酶活有抑制。对底物专一性的研究发现,该酶与甲壳素底物的作用具有专一性,对胶体甲壳素和甲壳素粉末水解活性很强,对淀粉与纤维素无水解能力。
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