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目的：比较大肠癌肿瘤相关成纤维细胞（CCAFs）的不同原代培养方法，筛选最佳培养条件。探索CCAFs不同于正常成纤维细胞的糖代谢特征。方法：高浓度双抗低温处理大肠癌标本；12d细胞计数法比较酶消化法与组织块植入法的CCAFs培养效率；利用6d贴壁率及12d爬出细胞数法比较不同组织块大小（1mm3，8mm3）、培养基种类（1640，DMEM，F12）、培养瓶材质（玻璃瓶，塑料瓶）与血清浓度（10%，20%）的培养效率；所获CAFFs行免疫荧光鉴定并绘制生长曲线；从免疫组化、免疫荧光、18F-FDG摄入率、乳酸测定、western blot等方面比较出CCAFs的糖酵解特征并测定肿瘤细胞对CCAFs的糖酵解特征的影响。结果以SPSS18.0软件进行统计分析。结果：1.组织块植入法与酶消化法原代培养的12d细胞计数分别为9.75±0.91×104与1.83±1.22×104（t=13.733，p=0.000）；12d细胞计数法提示高血清浓度（t=-3.549,P=0.0055），较大组织块（t=-1.115，P=0.01）可增加细胞培养效率；与F12与DMEM比较，1640培养基具有更高细胞培养效率和性价比，其回归方程为：Y=10.68750-3.96528X22-2.00694X3+1.03472X4；培养瓶材质不影响细胞数量（t=-0.116，P=0.910）；6d细胞爬出率与培养瓶和培养基有关，回归方程为Y=0.81367+0.20478X1-0.33312X2；2.原代培养的CCAFs特异性表达SMA-α及MCT4，肿瘤细胞则表达MCT1，CCAFs以及肿瘤细胞诱导的CCAFs均表现为高18F-FDG摄入和高乳酸排出，且在生长方面明显快于CNFs。结论：高浓度双抗低温处理组织标本，以含高浓度胎牛血清的1640培养基，采用大组织块植入法是CCAFs原代培养的优化方法，获得的CCAFs具有典型CAFs特征。肿瘤细胞诱导成纤维细胞活化，增加CCAFs的葡萄糖摄取与糖酵解能力，并释放酸性的、富含能量的乳酸进入细胞间质，为肿瘤细胞的增殖、转移提供能量并营造适于肿瘤细胞生长的酸性环境。