单核细胞增多性李斯特菌（Listeria monocytogenes,LM）简称单增李斯特菌,是一种革兰氏阳性杆菌,也是一种人畜共患的食源性胞内感染病原菌。广泛存在于自然环境中,在土壤和胞内环境中李斯特菌会面临多种应激反应,单增李斯特菌通过调控基因转录和蛋白表达以适应大部分来自环境的应激。在我们对李斯特菌氧化还原蛋白Yjb H和Grx的应激转录组测序研究结果中发现转录水平差异极显著的基因簇lmo0735-lmo0739。通过查阅文献资料我们得知lmo0734为这个基因簇的转录调控因子。因此,本研究将针对lmo0734在李斯特菌抗氧化应激和介导感染细胞过程中所发挥的生物学功能进行研究。1.单增李斯特菌转录调控蛋白Lmo0734介导的抗氧化应激研究本研究以单增李斯特菌转录调控蛋白Lmo0734为对象,采用分子生物学、应激生物学、细胞感染生物学和动物感染模型,探究李斯特菌转录调控蛋白Lmo0734介导的抗氧化应激和感染生物学功能研究。试验结果表明,单增李斯特菌缺失Lmo0734后分裂增殖能力和鞭毛运动能力均无显著变化,菌落外观变为锯齿状且不圆润;在氧化剂耐受试验中,我们发现缺失Lmo0734后对金属离子氧化剂(Cd²⁺、Cu²⁺)和巯基特异性氧化剂肼（diamide）的耐受能力增强了。根据以上试验结果,我们推测李斯特菌缺失Lmo0734后抵抗环境中氧化剂胁迫能力增强,环境中的存活能力增强。2.单增李斯特菌转录调控蛋白Lmo0734介导的感染生物学功能研究根据前述试验结果,李斯特菌缺失Lmo0734后抗氧化应激能力增强。那么李斯特菌缺失Lmo0734后感染宿主细胞的黏附、侵袭及增殖能力是否与耐受试验结果一致?为此我们进行感染不同细胞系试验。结果表明,李斯特菌lmo0734基因缺失株感染鼠源巨噬细胞RAW264.7后2 h、5 h和8 h的存活和增殖能力显著下降;感染人源肠上皮细胞Caco-2后黏附、侵袭以及增殖能力显著下降,与RAW264.7细胞试验结果一致;感染鼠源成纤维细胞L929后蚀斑数量无显著的变化,直径显著变小。最后,我们采用小鼠感染模型对李斯特菌lmo0734基因缺失株的致病力进行分析。结果表明,李斯特菌lmo0734基因缺失株感染小鼠24 h和48 h后,在小鼠肝脏和脾脏中的定殖能力均显著下降;在小鼠存活试验中,我们发现相较于野生株EGD-e,李斯特菌缺失Lmo0734后感染小鼠并致死的能力下降60%。为了进一步研究单增李斯特菌转录调控蛋白Lmo0734与毒力因子之间的调控关系,我们通过荧光定量PCR分析感染RAW264.7细胞6 h后李斯特菌毒力因子的转录水平;蛋白质免疫印迹分析活性炭激活毒力调控蛋白Prf A后李斯特菌毒力蛋白表达水平的变化。试验结果表明,李斯特菌缺失Lmo0734后毒力因子转录水平显著下降;毒力因子Prf A和Plc A的蛋白表达水平显著下降。综上所述,本研究首次表明李斯特菌转录调控蛋白Lmo0734负调控氧化应激的耐受能力;正调控李斯特菌的毒力因子。随后对转录调控蛋白Lmo0734与毒力因子之间的调控机制进行深入研究,李斯特菌毒力岛1基因转录和蛋白表达水平显著下降。本研究结果有助于我们深入理解单增李斯特菌转运调控蛋白Lmo0734介导的抗氧化应激和感染宿主细胞的生物学功能和机制。对于防控食源性胞内病原菌感染和保障人类健康安全具有重要的意义。