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长春新碱是长春花的主要成分,此实验主要通过线粒体途径研究长春新碱诱发人肝癌细胞SMMC-7721凋亡作用和凋亡机制。本实验首先采用MTT法和SRB法检测长春新碱如何抑制人肝癌细胞SMMC-7721的生长；然后用荧光显微镜和倒置显微镜观看长春新碱作用于细胞SMMC-7721后细胞形状如何改变；用碘化丙啶单染流式细胞仪测定长春新碱作用于细胞SMMC-7721后细胞凋亡率的情况；Fluo-3/AM单染激光共聚焦显微镜测定长春新碱作用于细胞SMMC-7721后细胞内部Ca2+含量如何改变；用罗丹明123染色液单染激光共聚焦显微镜测定长春新碱作用于细胞SMMC-7721后细胞内部线粒体跨膜电位强度如何改变；以及运用流式细胞仪分析长春新碱给药浓度不相同的给药组分别作用细胞SMMC-772124小时后,细胞内部ROS含量如何变化。研究表明,长春新碱可以使人肝癌细胞SMMC-7721生长受制约。实验中,MTT和SRB结果都显示长春新碱对细胞SMMC-7721生长具有良好抑制功能,而且长春新碱给药浓度越大作用时间越长抑制功能越强,其对SMMC-7721细胞的IC50值为0.036μmol/L。然后使用倒置显微镜观看在长春新碱充分作用于人体肝癌细胞SMMC-7721细胞48小时后,空白对照组可看到排列紧凑的细胞,细胞形状不变不破碎,给药组给药浓度越大细胞越生长的疏松,并且收缩褶皱,浓度高到一定程度细胞会破裂,形态会残缺,而且不会贴壁。这表示长春新碱可以使细胞SMMC-7721凋亡,且给药剂量越高越明显。使用Hoechst33258染液着色,用荧光显微镜观看,普通的细胞核显示出天蓝荧光且较均匀,但死亡的细胞的核会出现紧密较亮荧光和凋亡小体。此实验最后表明,长春新碱作用细胞SMMC-772148小时后改变了细胞外形,给药剂量越大细胞死亡的越明显,空白对照组最后显示细胞SMMC-7721中出现了均匀的染色质,有正常的核形状,中间剂量组发现碎裂细胞核,剂量最高组出现紧密亮度高的细胞核,这就表示长春新碱可以改变细胞SMMC-7721的形状。使用碘化丙啶进行单染然后用流式细胞仪测定结果显示浓度不相同的长春新碱作用细胞SMMC-772172小时后,有凋亡峰出现,各组细胞的凋亡率分别是(8.53±0.17)%,(10.78±0.06)%,(12.04±0.46)%,给药浓度越大数值越高,从而表明了长春新碱诱发SMMC-7721细胞的凋亡数越多抑制效果就越好。在作用机制方面,不同剂量(0.016、0.032、0.064μmol/L)长春新碱作用SMMC-7721细胞48h后,激光共聚焦扫描显微镜检测发现SMMC-7721细胞内钙离子增加,并且依赖于给药剂量的大小；对SMMC-7721细胞内线粒体跨膜电位强度的研究证明,长春新碱能降低细胞线粒体跨膜电位强度并且依赖于给药剂量的多少；研究细胞SMMC-7721内活性氧浓度后发现,长春新碱能升高SMMC-7721细胞的活性氧含量。综上所述,长春新碱可以使细胞SMMC-7721的生长受阻,并可以通过升高SMMC-7721细胞内的活性氧含量,氧化损伤线粒体膜,降低线粒体跨膜电位强度,使线粒体膜内外通透更容易,使cyt-c等一系列促凋亡的因子被释放出,引导细胞凋亡。线粒体膜通透性被改变同时引起细胞质中Ca2+流进线粒体内,钙离子含量升高将导致线粒体钙超载,加剧了线粒体膜胀破损伤,进一步降低了线粒体跨膜电位强度,然后又使更多cyt-c被释放出,使caspases酶有了活性,最后促使细胞一直走向凋亡