【摘 要】
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α-葡萄糖转苷酶是低聚异麦芽糖生产的关键酶制剂。低聚异麦芽糖属于功能性低聚糖，具有良好的促双歧杆菌增殖、强抗龋齿和降血脂等优良的生物学特性。 黑曲霉M-1是广西大学
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α-葡萄糖转苷酶是低聚异麦芽糖生产的关键酶制剂。低聚异麦芽糖属于功能性低聚糖，具有良好的促双歧杆菌增殖、强抗龋齿和降血脂等优良的生物学特性。 黑曲霉M-1是广西大学工业测试试验中心食品发酵工程研究所自主分离纯化、筛选的α-葡萄糖转苷酶菌株。本研究以黑曲霉M-1为出发菌株，设计特异的引物，采用反转录-PCR技术直接从黑曲霉总RNA中反转录并扩增出约3.0kb的cDNA。用EcoRI和BamHI双酶切PCR产物连接到载体pSE380的EcoRI／BamHI双酶切位点中，转化感受态细菌JM109，获得重组子。该重组子经相同的核酸内切酶水解获得约4.4kb和3.0kb两个片段，分别与pSE380和目的基因的大小相同。初步证实克隆的基因为α-葡萄糖转苷酶cDNA。经IPTG诱导表达12小时后，发酵液分泌蛋白SDS-PAGE呈现约110KD特异表达带，与专一性底物甲基-α-D-葡萄糖苷反应证明，表达产物具有α-葡萄糖转苷酶活性，最高达到226.8U／ml。 重组质粒克隆与表达的成功，将为利用其cDNA作为探针进行深入研究打下基础，并为利用pSE380载体构建其它重组质粒建立了一套成功的方法。
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