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第一部分选择性COX-2抑制剂对三阴性乳腺癌干细胞增殖与凋亡的干预研究 目的：研究辐射联合悬浮培养纯化三阴性乳腺癌干细胞后，选择性COX-2抑制剂(塞来昔布，celecoxib)对其增殖，凋亡的影响并初步探讨其可能机制，为应用选择性COX-2抑制剂治疗三阴性乳腺癌提供一定的理论依据。 方法：1、三阴性乳腺癌细胞悬浮培养传至第二代时，经8Gy放射线照射并传代培养后收集微球囊，以不同浓度celecoxib分别作用于纯化后的干细胞； 2、CCK-8法检测细胞活性； 3、AV-PI双染法测定细胞凋亡率； 4、半定量逆转录-聚合酶联反应(RT-PCR)检测VEGFmRNA表达变化； 5、蛋白印迹实验检测凋亡相关蛋白bcl-xl和bax表达量的变化。 结果：辐射联合悬浮球培养可以纯化三阴性乳腺癌干细胞；经不同浓度celecoxib作用后，三阴性乳腺癌干细胞活性受到抑制，实验组与对照组之间以及实验组各亚组之间均有显著性差异(P<0.05)；celecoxib可诱导三阴性乳腺癌干细胞凋亡，实验组与对照组及实验组各亚组之间的凋亡率均有显著性差异(P<0.05)；与对照组比较，celecoxib各浓度组VEGF mRNA表达量均显著降低，且成浓度依赖性，差异有统计学意义(P<0.05).蛋白印迹实验显示bcl-xl蛋白表达减少，bax蛋白表达增加，且呈浓度依赖性，实验组与对照组及实验组组间比较有统计学意义(P<0.05)。 结论：选择性COX-2抑制剂celecoxib可抑制三阴性乳腺癌干细胞体外增殖并诱导其凋亡，且呈浓度和时间依赖性：可能通过上调凋亡诱导蛋白Bax的表达并下调抗凋亡蛋白Bcl-xl和VEGF mRNA表达来实现。 第二部分选择性COX-2抑制剂对三阴性乳腺癌干细胞侵袭和粘附作用的影响 目的：研究选择性COX-2抑制剂celecoxib对辐射联合悬浮培养的三阴性乳腺癌干细胞的侵袭和粘附作用的影响，并初步探讨其发生机制。 方法：辐射联合悬浮培养纯化乳腺癌干细胞后，分别以不同浓度celecoxio进行干预，对照组不加celecoxib。 1、用细胞黏附实验检测干预后干细胞的粘附抑制情况； 2、Transwell侵袭实验检测celecoxib对干细胞的侵袭抑制； 3、半定量逆转录.聚合酶联反应(RT-PCR)检测N-cadherin mRNA的表达。 结果：细胞黏附实验显示，各实验组细胞黏附Matrigel凝胶的能力与对照组比较均明显降低，实验组与对照组之间以及实验组各亚组之间均有显著性差异(P<0.05)；Transwell实验显示，各实验组侵袭细胞数与对照组相比均明显减少，实验组与对照组之间以及实验组各亚组之间均有显著性差异(P<0.05)；RT-PCR结果显示，实验组N-cadherin光密度比值与对照组比较降低，差异显著(P<0.05)，实验组之间比较，差异不显著(P>0.05)。 结论：1、celecoxib能显著抑制三阴性乳腺癌干细胞的黏附和侵袭能力，其抑制效应与药物的浓度呈正相关。 2、celecoxib能下调三阴性乳腺癌干细胞N-cadherin mRNA的表达但无明显的浓度依赖性。