【摘 要】
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目的:检验GINS2基因在恶性黑素瘤(MM)中的表达情况,构建靶向GINS2–sh RNA慢病毒表达载体并鉴定,为MM的基因靶向治疗提供依据。方法:1、采用免疫组化染色对MM和癌旁组织中GINS2的表达进行分析,q PCR检测人侵袭性脉络膜黑素瘤细胞株(MUM-2C)及人恶性黑素瘤细胞株(A375)GINS2基因表达情况;2、合成GINS2-sh RNA序列与慢病毒载体GV115接合,进行慢病毒包
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目的:检验GINS2基因在恶性黑素瘤(MM)中的表达情况,构建靶向GINS2–sh RNA慢病毒表达载体并鉴定,为MM的基因靶向治疗提供依据。方法:1、采用免疫组化染色对MM和癌旁组织中GINS2的表达进行分析,q PCR检测人侵袭性脉络膜黑素瘤细胞株(MUM-2C)及人恶性黑素瘤细胞株(A375)GINS2基因表达情况;2、合成GINS2-sh RNA序列与慢病毒载体GV115接合,进行慢病毒包装和质量测评;3、运用GINS2-sh RNA慢病毒转染A375细胞株,通过q PCR技术检测sh GINS2组及阴性对照组GINS2基因m RNA的表达情况;Western-blot检测sh GINS2组及阴性对照组GINS2蛋白的表达水平,以验证转染效果。结果:1、通过免疫组化染色示:MM组织中GINS2的表达量相比于癌旁组织明显上升,差异有显著性(P<0.05);q PCR检测示:GINS2在MUM-2C细胞及A375细胞中均高丰度表达(ΔCt值≤12)。2、成功合成并鉴定GINS2-sh RNA慢病毒表达载体。3、GINS2-shRNA慢病毒转染A375细胞株后qPCR检测示:shGINS2组中GINS2基因m RNA表达量明显低于sh Ctrl组,差异具有极显著性(P<0.01);Western blot检测示:sh GINS2组中GINS2蛋白含量明显低于sh Ctrl组。结论:1、GINS2基因在MM组织及细胞中的表达均明显增高;2、成功构建了GINS2-sh RNA慢病毒表达载体,且成功转染A375细胞株,使GINS2基因的m RNA及蛋白表达均明显下降,证实GINS2-sh RNA重组慢病毒表达载体构建成功,为进一步研究该基因在MM发生发展中的作用奠定基础。
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