目的:内毒素是革兰阴性细菌外膜的重要组成部分,也是介导脓毒症的重要病原分子,它由O-侧链多糖、核心多糖和脂质A(Lipid A)三部分组成,其中Lipid A是革兰阴性细菌最为保守的部位,也是LPS的活性中心[1]。LPS在脓毒症发生过程中具有重要作用,因此,拮抗LPS是治疗和预防由革兰阴性细菌引起的脓毒症的重要手段之一[2-13];传统中药在拮抗内毒素方面积累了宝贵的经验,医学实践证明,许多中药在体内外都具有抗内毒素作用[14-15],但由于跟踪手段的复杂性,限制了具有潜在抗内毒素活性中药的深入研究,本课题利用本实验室建立的生物传感器检测平台,在前期工作基础上,结合国内外文献报道,选择与Lipid A具有较高结合活性的侧柏叶、牡丹皮,进行拮抗内毒素活性组分的定向分离,并对所得到的活性组分进行体内外活性评价。方法:(1)将Lipid A包被于生物传感器非衍生板,用不同浓度的多粘菌素B(PMB)测定与Lipid A的平衡解离常数(KD),以此建立中药活性组分跟踪检测体系。(2)利用生物传感器,采用萃取、硅胶柱层析、聚酰胺层析、离子交换-HPLC等技术对侧柏叶、牡丹皮进行活性组分的定向分离。(3)通过活性组分对LPS介导RAW264.7分泌细胞因子的抑制实验、LPS体内外中和实验及对LPS和热灭活细菌攻击小鼠的保护实验,以评价所得活性组分对内毒素的拮抗作用。结果:(1)用Lipid A包被后的非衍生板(NDC)共振扫描峰成尖细对称的单峰图形,包被值为1994 RU(arc second),包被量约为3.4 ng/mm2,与PMB的平衡解离常数(KD)为5.59×10-8 M,非衍生板的包被曲线、共振峰和KD值均符合实验所需标准,可用于样品的检测。(2)利用生物传感器、硅胶柱层析、聚酰胺层析等技术,从侧柏叶水提取物中定向分离得到一个与Lipid A高结合组分,该组分对致死剂量LPS攻击的小鼠无显著的保护作用(保护率为22.2%),在小鼠体内对LPS无显著的中和能力(中和率为33.4%)。(3)从牡丹皮水提取物中分离到一个与Lipid A具有较高结合活性的组分,该组分在体外能抑制LPS介导的RAW264.7细胞释放TNF-α,对致死剂量LPS攻击小鼠的保护率为44.4%,对致死剂量热灭活大肠杆菌攻击小鼠的保护率为37.5%,与对照组比较,均具有显著性差别。结论:(1)从侧柏叶中分离到一个与LipidA具有较高结合活性的组分,但对致死剂量LPS攻击的小鼠并无明显的保护作用,在小鼠体内也无显著的LPS中和能力,提