论文部分内容阅读
目的： 人乳头瘤病毒（Human papillomavirus，HPV）持续感染是宫颈癌发生的首要原因，通过检测HPV主要衣壳蛋白L1（Major capsid protein L1）可以筛查是否有HPV感染。本研究通过L1蛋白单克隆抗体分组检测不同型别HPV L1蛋白和临床病变组织细胞，了解该单克隆抗体的检测能力，为后期利用该抗体研制HPV感染检测试剂盒提供参考。 方法： (1) 将HPV单克隆抗体分为3A9、5A4、4G12、3A9+5A4、3A9+4G12、5A4+4G12和3A9+5A4+4G12七组，通过蛋白免疫印迹实验检测相同量的Caski细胞L1蛋白和HPV18、31、45、52和58型重组L1蛋白，将不同抗体组检测的结果进行比较。 (2)考马斯亮蓝染HPV18、31、45、52和58型重组L1蛋白聚丙烯酰胺凝胶电泳的凝胶，与对应3A9+5A4+4G12抗体蛋白免疫印迹检测L1蛋白结果比对，比较该抗体组对不同型别L1蛋白的检测能力。 (3) 将HPV单克隆抗体分为3A9、5A4、4G12、3A9+5A4、3A9+4G12、5A4+4G12和3A9+5A4+4G12七组，通过酶联免疫吸附实验检测相同量的HPV18和52型重组L1蛋白。 (4)使用3A9+5A4+4G12抗体，免疫荧光染色检测尖锐湿疣组织和宫颈脱落细胞中HPV L1蛋白，同时用HPV分型试剂盒检测对应病例脱落细胞HPV。 结果： (1) 单克隆抗体3A9、5A4、4G12对HPV L1蛋白检测能力不同；三株抗体组合使用能检测出实验中六种型别的HPV L1蛋白，该抗体组在HPV18型和HPV52型L1蛋白检测中有明显优势，在其他四型L1蛋白检测中虽不是最敏感组，但都表现出稳定的检测能力。 (2)单克隆抗体3A9、5A4、4G12组合使用对不同型别的HPV L1蛋白检测能力不同。 (3)单克隆抗体3A9、5A4、4G12可以通过酶联免疫吸附实验检测出HPV L1蛋白，且抗体组合使用检测能力更强。 (4)单克隆抗体3A9、5A4、4G12组合使用可以在HPV分型检测阳性的尖锐湿疣组织及宫颈脱落细胞中检测出HPV L1蛋白。 结论：研究初步证明，单克隆抗体3A9、5A4、4G12组合使用可以检测出不同型别HPV L1蛋白，且三株抗体组合使用检测能力优于单一抗体或者两两组合使用；针对不同型别HPV L1蛋白，该抗体组的检测能力也不同。该抗体组可以用于ELISA法检测HPV L1蛋白，同时也可以检测出尖锐湿疣组织和宫颈脱落细胞中的HPV L1蛋白。可见该单克隆抗体组在开发用于宫颈癌预防性筛查的HPV检测试剂盒方面具有一定的潜力。