豌豆根瘤菌NolR蛋白负调控机制初探及NodD蛋白与其诱导剂naringenin相互作用研究

来源 :中国科学院上海生物化学和细胞生物学研究所 中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所 中国科学院上海生命科学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:tonybenben
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NolR是存在于Rhizobium和Sinorhizobium中的一类负调控蛋白,但是其参与结瘤基因的可诱导转录的机制尚不清楚。为了检测是否还有其他因子调控NolR的功能,我们通过同源重组在没有共牛大质粒(pSym)的Rhizobium 8401菌株中构建了nolR的插入突变株MR114。通过观测8401及MR114中结瘤基因的转录,发现三个可诱导的结瘤基因(nodA,nodF和nodM)在MR114中均组成型表达。我们的结果显示,pSym是Rhizobium leguminosarum A34菌株中NolR完全发挥其抑制功能所必需的。另外,突变株MR114为进一步研究与NolR发生相互作用的因子提供了有用的工具。 遗传学及其他的研究业务表明NodD在其激活过程中与其诱导物之间可能有直接的相互作用,但是这种相互作用尚无分子水平上的证据。在这篇文章中,我们利用FRET技术在体外检测了NodD与其诱导物naringenin是否有直接的相互作用。通过分子生物学手段,我们在NodD上引入了四半胱氨酸motif(Cys-Cys-Pro-Gly-Cys-Cys),这样就可以利用荧光染料FlAsH标记NodD。利用化学合成的方法,我们将荧光素衍生物标记到naringenin上得到YA6006。在体外使用4μM的FlAsH和6μM的YA6006进行FRET检测时,我们发现荧光受体之一,NodD(90R6)-FlAsH的荧光强度升高了13%,这表明在体外NodD可与其诱导物naringenin发生直接相互作用,反应中心很可能靠近NodD的铰链区1。
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