【摘 要】
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E-cadherin(E-cad)存在于人和动物上皮细胞,是维护上皮细胞形态、结构完整的重要分子,其在肿瘤转移、胚胎发育、胚胎附植等生理行为中起着重要作用。本研究将RACE技术和各种PCR
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E-cadherin(E-cad)存在于人和动物上皮细胞,是维护上皮细胞形态、结构完整的重要分子,其在肿瘤转移、胚胎发育、胚胎附植等生理行为中起着重要作用。本研究将RACE技术和各种PCR技术相结合,克隆猪E-cad基因全长cDNA序列,并用RT-PCR检测猪孤雌胚胎早期发育不同阶段E-cad基因的表达,为更进一步研究不同来源胚胎该基因的表达打下基础。
试验获得猪E-cad cDNA 4283 bp,包括2652bp的ORF(开放阅读框)、105bp的5UTR(非编码区)区和1526 bp的3UTR区。该阅读框编码883个氨基酸残基的E-cad蛋白前体,其中信号肽包括22个氨基酸,胞外区、跨膜区和胞浆区分别包括689、22、150个氨基酸。推导氨基酸序列多重比对结果表明,猪与牛、马、狗、人、黑猩猩、鼠E-cad氨基酸一致性分别为89%、87%、86%、84%、83%、83%。
猪E-cad基因编码的氨基酸含有一个跨膜位点,其胞外区域含同种亲和性特异粘附识别位点HAV(His-Ala-Val)和多个Ca2+结合位点及一个糖基化位点。
用RT-PCR检测猪卵巢卵母细胞、体外成熟后卵母细胞和颗粒细胞、孤雌激活后2-6-细胞(8-细胞前)、8-细胞、桑椹胚、囊胚阶段E-cad基因的表达,结果表明,猪卵母细胞到孤雌胚各阶段均有E-cad基因的表达。
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