目的:研究不同浓度垂盆草苷对吉富罗非鱼脂肪肝病疗效,用蛋白质组学方法分析各个比较组差异蛋白的表达以及代谢通路,讨论垂盆草苷治疗脂肪肝病的作用机理等,为中草药应用于治疗鱼类脂肪肝疾病提供理论依据。方法:本实验分为两个阶段,第一阶段为脂肪肝模型建立阶段。该阶段分为低脂组和高脂组两个组。通过测量体长体重、肝体比等生长指标和HE染色等来确定模型建立成功。第二个阶段为饲料中添加垂盆草苷治疗阶段。该阶段将实验鱼分为六组,分别为NC组、FLSSB0组、FLSSB50组、FLSSB100组、FLSSB150组、FLSSB200组。每组设置三个重复,取样时每重复组取十尾鱼提取蛋白。样品采用i TRAQ标记,用Thermo nano LC1000纳升级高效液相色谱系统来分离肽段,Q Exactive组合式质谱仪鉴定。本实验使用Proteome Discoverer 1.3软件将对肽段鉴定的原始图谱文件提交至SEQUEST软件进行数据库检索。设定两组间表达量比值大于1.2或小于0.83,p值小于0.05为筛选差异蛋白阈值,将筛选到的差异蛋白进行KOG分类注释、KEGG Pathway富集分析,KEGG Pathway富集聚类分析,差异蛋白表达模式分析,差异蛋白网络互作分析。在上述分析结果的基础上筛选与脂肪肝形成和治疗相关的KEGG pathway和关键蛋白。结果:1、肉眼观察到高脂组鱼游动缓慢、腹部变大、反应迟钝、食欲速减。解剖以后观察到体内脂肪沉积,出现白肝黄肝。测量和计算生长指标发现脂肪肝病鱼体重低于正常组,肝体比随着饲养周数增加逐渐高于正常组。HE染色结果表明高脂组细胞排列不规则,细胞核严重偏移,证明了脂肪肝模型的成功建立。2、测定血清中生理生化指标丙转氨酶、谷草转氨酶、过氧化氢酶、丙二醛的含量。加药量为100 mg/kg时ALT含量最低,加药量为150 mg/kg时AST含量最低,加药量为100 mg/kg时CAT含量最高,加药量为150 mg/kg时MDA含量最低。3、通过KOG注释分类可知,当加药量达到150 mg/kg时,与脂质转运与代谢功能的相关蛋白出现显著上调,此时对脂肪肝治疗效果最为显著。4、通过KEGG Pathway分析可知,高脂饮食导致下调蛋白富集在PPAR信号通路,激活了脂肪组织中的PPARα、PPARβ、PPARγ,促进有关的蛋白下调表达,增加了内肝脏中脂肪积累,造成了脂肪肝病的发生。加药以后会导致上调蛋白富集在PPAR信号通路,激活了脂肪组织中的PPARα、PPARβ、PPARγ,促进有关蛋白上调表达,对脂肪肝病治疗作用显著。5、FLSSB150-vs-FLSSB0共筛选获得差异蛋白334个,其中上调蛋白199个,下调蛋白135个。这些蛋白参与了核糖体循环、PPAR信号通路、丁酸甲酯代谢、亚麻酸代谢、脂质代谢、脂质结合、生物合成、柠檬酸循环、AMPK信号通路等代谢过程。结论:通过表观观察,生理指标检测,生物信息学分析,几组加药组进行比较后,我们判断出当垂盆草苷加药量为100～150 mg/kg时,治疗效果最好。本研究不仅为治疗脂肪肝病提供新靶点,同时也对生产上开发高效的新型中草药具有重要的意义。