[研究背景]先天性心脏病（congenital heart disease,CHD）是一种严重威胁儿童生命健康的先天性畸形,其发病率在所有先天性出生缺陷患者中居首位。同时,CHD是最常见的致死性畸形,占比高达30%-50%。室间隔缺损（ventricularseptal defect,VSD）是最常见的CHD,约占CHD的20%-35%。遗传因素在VSD病因中占据的重要地位。尽管基因技术已取得重大进展,但VSD的病因和发病机制尚不清楚。研究表明,CITED2、ISL1等心脏相关基因编码区突变参与了 VSD的发生与演变。但是目前尚无研究筛选VSD患者CITED2和ISL1基因启动子区域突变位点,以及探究其与VSD发生的关联。因此,本研究拟探究VSD患者CITED2和ISL1基因启动子区域突变及其在VSD形成过程中的作用,以期为VSD的基因诊断和精准干预提供理论基础,为患者的预后带来帮助。[研究目的]探究CITED2和ISL1基因启动子区域突变对VSD形成的影响,为VSD的病因学研究提供新的视角。[研究方法]本研究筛选2018年1月至2019年8月于我院行VSD修补术的患者。将其与健康儿童进行性别及年龄匹配后,分别设定为病例组和对照组。收集所有研究对象的血样标本提取基因组DNA,而后进行目的基因片段扩增及Sanger测序。筛查CITED2和ISL1基因启动子区域突变,并使用双荧光素酶报告基因检测进行功能验证,以评估其对基因表达的影响。此外,通过凝胶迁移实验（electrophoreticmobility shift assay,EMSA）和JASPAR数据库,我们探究了基因启动子区域突变可能破坏、产生或影响的转录因子结合位点。[研究结果]经过年龄和性别匹配,本研究共纳入400名研究对象,包括200名散发性单纯VSD患者作为病例组和200名健康儿童作为对照组。通过筛查研究对象的CITED2基因启动子区域序列,我们发现5个仅在病例组中出现的突变位点。而后进行双荧光素酶报告基因检测,其中4个突变位点显著降低CITED2基因启动子转录活性（P<0.05）。此外,我们通过EMSA实验发现其中3个突变位点明显地影响了转录因子与启动子的结合。JASPAR数据库生物信息学分析的结果表明CITED2基因启动子区域突变可能通过破坏、产生或影响的转录因子结合位点造成CITED2蛋白的低表达,进而导致VSD的发生。通过Sanger测序,我们在ISL1基因启动子区域发现了 5个仅VSD患者中出现的突变位点。细胞功能实验显示,有3个突变位点显著降低ISL1基因启动子的活性（P<0.05）。EMSA实验结果发现,这3个突变位点影响转录因子与ISL1基因启动子的结合。此外,通过JASPAR数据库,我们发现有一系列的潜在转录因子结合位点可能会因为ISL1启动子区域突变而造成破坏,产生或影响,进而造成ISL1蛋白的低表达和VSD的形成。[研究结论]本研究首次在散发性单纯VSD中国汉族患者中发现了 CITED2和ISL1基因启动子区域突变位点。同时,其显著改变了 CITED2和ISL1基因的表达及影响转录因子与启动子的结合,进而可能导致VSD的发生。本研究为探究VSD发生机制提供了新见解。