目的：本研究以RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞为研究对象,观察黄芪多糖(APS)对巨噬细胞内胆固醇酯含量及ABCA1表达的影响,初步探讨APS调节巨噬细胞内胆固醇酯含量的作用机制。方法：1.制备氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL):应用GuSO4氧化法氧化修饰LDL成为ox-LDL。2.建立泡沫细胞模型：采用体外培养小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞,用50mg/L ox-LDL诱导48h,建立泡沫细胞模型；用油红O染色在光镜下鉴定泡沫细胞形态及变化。3.酶法测定泡沫细胞内胆固醇酯含量：待细胞生长至对数生长期时,用不含胎牛血清的DMEM培养基行饥饿疗法24h及荷脂48h后,给予不同浓度APS(0、10、20、50、100mg/L)干预泡沫细胞24h后,酶法检测泡沫细胞内胆固醇酯的含量；给予100mg/LAPS干预泡沫细胞不同时间(0、6、12、24、48h)后,酶法检测泡沫细胞内胆固醇酯的含量。4.从蛋白水平及分子水平检测APS对泡沫细胞内ABCA1表达的影响：将RAW264.7巨噬细胞诱导为泡沫细胞后,不同浓度APS作用泡沫细胞24h后,ELISA及RT-PCR检测ABCA1的蛋白及mRNA表达。结果：1. ox-LDL制备成功LDL氧化结束后,在532nm处测得空白对照品、标准品及样本品的吸收值为0.0013、0.1420、0.0165,蛋白浓度为50mg/L,据此计算得出TBA含量为21.61μmol/g, TBA含量可反映LDL氧化修饰程度。2.泡沫细胞模型建立倒置显微镜下观察结果示：贴壁生长的巨噬细胞多以类圆形和不规则多边形为主,一般含1-2个核,有伪足,细胞胞体较小,细胞生长很快,5-6天可融合；巨噬细胞吞噬ox-LDL48h后可见细胞体积增大,胞内可见大小不等的脂滴；油红O染色后,细胞浆内大量红染(约88%)。3.酶法测定泡沫细胞内胆固醇酯含量对照组、10、20、50、100mg/L的APS作用于泡沫细胞24h后,细胞内胆固醇酯含量分别为45.15±3.57、37.67±2.26、34.59+3.51、28.57±10.34、15.92±3.86nmol/mgo各APS组与对照组比较,差异具有统计学意义(P<0.01)；100mg/L的APS作用于泡沫细胞0、6、12、24、48h后,细胞内胆固醇酯含量分别为55.35±15.07、33.05±6.12、22.33±5.54、13.51±2.76、15.76±3.89nmol/mg。各APS组与对照组比较,差异具有统计学意义(P<0.01)。4.蛋白水平检测APS对泡沫细胞内ABCA1表达的影响对照组、10、20、50、100mg/L的APS作用于泡沫细胞24h后,采用ELISA方法检测ABCA1的蛋白表达,ABCA1抗原OD±SD值如下,对照组：0.3053±0.0055；10mg/LAPS组：0.3251±0.0083;20mg/LAPS组:0.3603±0.012750mg/LAPS组:0.3792±0.0092；100mg/LAPS组：0.3993±0.012。根据其OD值大小可判断各组ABCA1的蛋白表达水平。各APS组与对照组比较,差异具有统计学意义(P<0.01)。5.分子水平检测APS对泡沫细胞内ABCA1表达的影响对照组、10、20、50、100mg/L的APS作用于泡沫细胞24h后,采用RT-PCR方法检测ABCA1的mRNA表达,ABCA1与β-actin OD比值之比如下,对照组0.41±0.028;10mg/LAPS组：0.59±0.032；20mg/LAPS组：0.64±0.082;50mg/LAPS组：0.77±0.109：100mg/LAPS组：0.95±0.069。根据其比值大小可判断各组ABCA1的相对表达水平。各APS组与对照组比较,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论：1.应用GuSO4氧化法可成功氧化修饰LDL成为ox-LDL。2.APS可显著减少泡沫细胞内胆固醇酯的含量。在0-100mg/L范围内,泡沫细胞内胆固醇酯含量随APS浓度增高而减少,在APS浓度为100mg/L时,胆固醇酯含量最低；在0-48h范围内,泡沫细胞内胆固醇酯含量随APS作用时间增加而减少,在APS作用时间为24h时,胆固醇酯含量最低。3.APS可上调泡沫细胞内ABCAl的表达。通过ELISA法、RT-PCR法检测APS对泡沫细胞内ABCA1表达的影响,实验结果证实APS减少泡沫细胞内胆固醇酯含量可能是通过上调ABCA1的表达来实现的,其调节作用在一定浓度范围内呈现剂量效应关系。这可能是其抗动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)发生发展的机制之一。