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研究背景：Waardenburg综合征(Waardenburg Syndrome,WS)是以听力障碍和色素分布异常为主要表现的遗传综合征,以常染色体显性遗传为主,具有高度的遗传异质性。WS根据临床表型不同,可以分为四型：WS1、WS2、WS3、WS4。其中WS2是最常见的一种类型,目前发现致病基因有MITF、SOX10和SNAI2,MITF和SOX10约各占所有WS2病人致病原因的15%,仍有70%的WS2病人未找到致病因素,且基因突变如何导致表型发生的分子机制尚不清楚。目的和方法：为了进一步探讨WS2患者的基因型与表型的内在联系,本研究通过以下方案探讨WS的分子机制：1.收集WS2家系,采集每个患者的详细临床资料,并对相关致病基因MITF、SOX10、 SNAI2的外显子进行突变筛查。2.对发现的MITF基因R255X突变,构建真核表达质粒pCMV-R255X-Flag,瞬时转染黑色素瘤细胞,Western Blot验证突变蛋白表达量,免疫荧光检测突变蛋白的亚细胞分布情况。3.将Mitf RNAi品系果蝇与GAL4品系果蝇杂交,观察子一代果蝇的表型。结果：1.总共收集到3个WS2家系,5个散发病例。并在其中的两个大家系中分别发现MITF基因的c.763C>T(R255X)和c.328C>T (R110X)杂合突变,剩余病例未找到致病原因。R255X已在1个4代中国家系中报道,而R110X则见于2个中国家系,进一步验证发现这两个突变在各自的家系中是共分离的。2.成功构建pCMV-R255X-Flag突变质粒,瞬时转染进UACC903黑色素瘤细胞,发现突变的蛋白表达量明显减少,证实R255X突变的MITF基因编码的是一个截短型蛋白；免疫荧光实验发现,野生型MITF蛋白主要分布在细胞核中,而R255X突变蛋白除了在细胞核中分布外,也有相当大的一部分在细胞质中分布。3.运用GMR-GAL4、Da-GAL4驱动UAS-Mitf RNAi表达,其F1代的表型与对照组无明显差异。结论：1.MITF基因的R255X和R110X是中国人群WS2的突变热点,约75%的WS2病例未找到致病原因,提示存在未知的致病基因。2.R255X突变蛋白由于丧失了部分HLH、全部Zip及之后的全部区域,出现蛋白表达下降和异常的亚细胞分布,导致WS2的发生。完整的蛋白质和正确的亚细胞分布,对于MITF功能的行使具有重要意义。3.果蝇Mitf的表达具有时空上的特异性,需要更特异性的GAL4才能驱动其表达。