牛病毒性腹泻病毒（Bovineviraldiarrheavirus，BVDV）可感染多种动物，但以牛为主。受感染牛主要发生繁殖障碍及免疫抑制，给世界养牛业带来了巨大的经济损失。CD46是BVDV的特异性膜受体，能介导该病毒感染牛树突状细胞（DendriticCells，DCs）。DCs既是免疫应答启动者，也是免疫耐受的诱导者。故为初步探究CD46分子在BVDV感染树突状细胞介导的免疫应答中的可能作用，本研究开展了以下实验工作：　　（1）采用Real-TimePCR技术，对新疆褐牛不同组织（心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、小肠、大肠、胃、肌肉、卵巢、乳腺）CD46基因表达谱进行了分析。结果显示，CD46基因mRNA在所检测的11种标本中均有表达，不同组织部位的表达存在部位间差异，其中肝脏CD46基因mRNA相对表达量最高（P＜0.05）。　　（2）根据GenBank提供的牛CD46基因参考序列（NM_001242561.1），设计含完整开放阅读框（openreadingframe，ORF）的CD46基因特异性引物，采用RT-PCR方法从新疆褐牛脾脏中扩增得到CD46基因，将其克隆至pVAX1质粒载体上，构建重组质粒pVAX1-CD46。经生物学分析后，设计特异性引物，以pVAX1-CD46为模板PCR扩增CD46基因编码蛋白抗原性较高且不含信号肽胞外段，将其亚克隆于pET-28a（+）载体中。将重组质粒pET-28a-△CD46转化于E.coliRosetta-gamiB（DE3）感受态细胞，经IPTG诱导表达了His-△CD46融合蛋白。表达产物经切胶纯化后免疫新西兰大白兔，制备了His-△CD46融合蛋白多克隆抗体。ELISA结果显示，其抗体效价高于1:128000。取重组质粒pVAX1-CD46转染BHK-21细胞，Westernblot法检测制备的多克隆抗体特异性。结果显示，制备的多克隆抗体能够特异性的识别pVAX1-CD46真核表达蛋白。　　（3）依据siRNA设计原则，设计3对牛CD46基因保守序列编码shRNA的正义、反义寡核苷酸链，将其退火后分别克隆至pLL3.7质粒载体上，获得CD46基因shRNA序列重组质粒pLL3.7-CD46-shRNA。利用脂质体转染法，将其分别转入MDBK细胞。Real-timePCR分析发现，重组质粒pLL3.7-CD46-shRNAc最有效地沉默了CD46基因mRNA（P＜0.05），其沉默效率为58.67%；Westernblot结果表明，重组质粒pLL3.7-CD46-shRNAc明显抑制转染细胞中CD46蛋白的表达。　　（4）将由新疆褐牛外周血分离得到的单核细胞，利用brGM-CSF、brIL-4刺激分化为MDDCs。采用脂质体转染法，分别取pVAX1-CD46、pLL3.7-CD46-shRNA转染MDDCs，再经BVDV感染制备干预MDDCs。通过Real-timePCR技术检测树突状细胞表型及其细胞因子mRNA水平。结果显示，与未转染细胞组相比，CD46基因过表达MDDCs中CD40、CD80、CD86和MHCII的mRNA水平均明显升高（P＜0.05）；CD46基因沉默的MDDCs中CD40mRNA水平也明显升高（P＜0.05），CD86mRNA水平变化不明显（P＞0.05），而CD80和MHCII的mRNA水平均明显下降（P＜0.05）。与未转染细胞组相比，CD46基因过表达组IL-10和IL-12mRNA水平变化不明显（P＞0.05），而CD46基因沉默的MDDCs中IL-10和IL-12mRNA的表达均明显下降（P＜0.05）。　　综上所述，本研究从新的角度初步揭示了CD46分子对BVDV感染树突状细胞成熟、初始T细胞增殖和分化的影响，为解决DCs对BVDV的免疫抑制作用提供新的思路，对控制BVD的发生具有重要意义。