泛素化是生命体内重要的蛋白翻译后修饰,可以靶向蛋白降解,激活蛋白调控信号通路。依据宿主应激的外源核酸的不同,抗天然免疫通路可分为抗DNA病毒的CGAS-MAVS-IFNβ1通路和抗RNA病毒的RIG-I-STING-IFNβ1/NFκB通路。抗病毒天然免疫通路中许多关键蛋白的激活都依赖于K63泛素化,因此泛素化研究对于解析天然免疫通路至关重要。至今还未有研究将两个通路中的蛋白泛素化进行系统比较。基于高分辨质谱的蛋白质组学凭借其高通量和准确性成为翻译后修饰研究中主流系统性研究方法。本文结合同位素代谢标记技术以及泛素化肽段富集技术,经过高分辨质谱分析,以THP1细胞为宿主,定量分析了DNA病毒HSV和RNA病毒Se V感染下宿主蛋白泛素化的变化。我们一共定量了3843个蛋白和4147个泛素化位点。在HSV实验组筛选到123个显著上调蛋白和71个显著下调蛋白,以及300个显著上调泛素化位点和92个显著下调泛素化位点。在Se V实验组筛选到99个显著上调蛋白和68个显著下调蛋白,以及144个显著上调泛素化位点和63个显著下调泛素化位点。我们发现泛素化水平间的相关性强,泛素化与蛋白水平相关性弱,表明大部分泛素化变化不受蛋白本底的影响。通过泛素化位点基序分析,我们发现泛素化位点附近显著富集酸性氨基酸或者不带电荷的脂肪族氨基酸,显著缺少碱性氨基酸以及半胱氨酸。在HSV实验组与Se V实验组总计筛选到400多个显著变化的泛素化位点,小部分为下调位点且在两实验组中趋势一致,大部分为上调位点且其中超半数存在较大差异,通过基因聚类分析,HSV实验组更倾向于富集DNA病毒的相关的c GAS通路,Se V实验组更倾向于富集RNA病毒的相关RIG-I通路,两组实验差异与预期相符,证明组学筛选的准确性,为后续研究不同泛素化蛋白在两类天然免疫通路中的关键作用提供丰富的资源。通过蛋白互作分析,我们在Se V实验组找到IMPDH2与“Innate immunity”和“VRNP assembly”通路中的蛋白存在密集相互作用。IMPDH2蛋白本底水平不变,但K124泛素化显著上调,在HSV实验组中无显著变化。通过基因过表达/敲低实验验证IMPDH2通过抑制IκBα降解负调控NFκB通路,通过免疫共沉淀发现IMPDH2与TAK1存在特异性的相互作用。本研究比较了RNA和DNA病毒引发宿主蛋白泛素化变化的异同点,为研究蛋白泛素化在两类病毒与宿主互作天然免疫中的关键作用提供新思路和资源。