【摘 要】
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2013年,浙江省疾控中心报道了 一起由X血清群ST-7分离株引起的侵袭性脑膜炎病例。然而,在中国超过50%的侵袭性脑膜炎病是由脑膜炎奈瑟菌A血清群引起;而且,ST-7脑膜炎奈瑟菌株
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2013年,浙江省疾控中心报道了 一起由X血清群ST-7分离株引起的侵袭性脑膜炎病例。然而,在中国超过50%的侵袭性脑膜炎病是由脑膜炎奈瑟菌A血清群引起;而且,ST-7脑膜炎奈瑟菌株通常属于A血清群。因此,我们推测该次感染是由于发生了荚膜转换。为了确定该株脑膜炎奈瑟菌是否来源于血清群X菌和ST-7血清群A的英膜转换,我们对X血清群ST-7株菌和3株A血清群菌ST-7的英膜基因座以及它们的侧翼区域进行了测序。通过生物信息学方法分析了英膜转换的基因重组位点,发现该ST-7株替换了来源于X血清群galE至ctrC之间大约8450 bp的DNA片段。同时我们通过荚膜重组体外实验测定了荚膜转换频率和涉及的重组基因片段的大小,结果发现英膜重组的频率大约是6.3×10-6每细菌每微克DNA,荚膜重组所涉及到的重组基因片段大小约为8.1-9.6kb。脑膜炎奈瑟菌被中性粒细胞吞噬后,中性粒细胞可以产生大量的活性氧族(reactive oxygen species,ROS)以影响细菌生存,同时胞内低pH环境也不利于细菌的生长,但是有研究证明该菌在中性粒细胞中数量呈现先降低后升高的状态。分子伴侣是一类可以协助细胞内其他蛋白质正确折叠的蛋白质,因此,我们推测分子伴侣对于被ROS和低pH损伤的脑膜炎奈瑟菌蛋白质有修复作用,从而有利于细菌在细胞内的存活。我们的实验表明相比野生型脑膜炎奈瑟菌,其分子伴侣突变体对于热、百草枯、过氧化氢、次氯酸和酸性环境更为敏感,暗示分子伴侣对于脑膜炎奈瑟菌的致病性有重要影响。在对脑膜炎奈瑟菌分子伴侣的研究中,我们开发出一种新型的基因无痕敲除方法。这一方法组合使用抑菌型抗生素和杀菌型抗生素提高反向筛选的效率。该方法同时适应于另一革兰阳性李斯特菌,说明该方法可能适用于革兰阳性和革兰阴性细菌基因敲除。
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