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思诺沙星（ENR）属于氟喹诺酮类合成抗菌剂，用于治疗家畜禽感染性疾病。随着ENR的大量使用，残留于畜禽可食组织中的ENR及其代谢产物环丙沙星（CIP）引发了严重公共卫生问题。为此，欧盟规定在可食性动物组织中ENR和CIP的最高残留限量（MRL）为30μg／kg。目前，已建立了包括HPLC、ELISA在内的多种方法用于检测动物组织中的ENR残留。HPLC存在样品前处理严格，耗时，成本高等缺点；ELISA方法操作简单，经济而可行。 本研究旨在建立一种间接竞争酶联免疫吸附试验（Ci-ELISA）检测鸡组织中ENR残留。通过N-羟基琥珀酰亚胺活性酯法（NHS法）将半抗原ENR分别与蛋白质载体牛血清白蛋白（BSA）和卵清蛋白（OVA）偶联成为全抗原ENR-BSA和ENR-OVA。ENR-BSA作为免疫原免疫家兔制备抗血清，ENR-OVA在ELISA中作为包被原。用方阵滴定法确定包被原（ENR-OVA）、抗血清、羊抗兔IgG-HRP的最佳工作浓度及反应时间，而后在此基础上建立Ci-ELISA方法检测实验肉仔鸡组织中ENR残留情况，并对方法的精密度、准确度、灵敏度和选择性指标进行评价。其结果如下： 1．ENR-BSA，ENR-OVA，ENR，BSA和OVA五种溶液经过200nm～400nm波长紫外扫描，BSA和OVA分别在289nm和291nm波长处有最大吸收峰，ENR在333nm波长处有最大吸收峰，ENR-BSA和ENR-OVA的最大吸收峰分别在319nm和320nm波长处，此外还分别都在332nm波长处有一吸收峰，说明ENR-BSA和ENR-OVA的吸收光谱是ENR的吸收光谱与蛋白质吸收光谱的整和，其中含有ENR特征峰。该结果表明ENR已与蛋白质载体成功偶联。 2．用间接ELISA法检测制得的抗血清效价在1：3200～1：6400，最佳工作浓度（OD值=0.4）为1：800，包被原ENR-OVA的最佳工作浓度为1：40，羊抗兔IgG-HRP的稀释浓度为1：1000。 3．建立的检测ENR的Ci-ELISA方法在PBS介质中ENR不同浓度（3000，300，30，3，0.3，0.03ng／ml）的情况下表示其精密度的批内变异系数和批间变异系数分别为4.5～38.1％和8.8～41.9％；表示方法准确度的鸡肌肉、肝脏和肾脏中ENR添加平均回收率分别为35.48～63.74％，69.08～86.97％和51.04～72.59％；表示方法灵敏度的ENR在鸡肌肉、肝脏、肾脏和PBS中的最低检测限（LOD）分别为7.82，12.71，8.75和1.62ng／ml；在PBS中ENR 50％抑制浓度(I50)为16.26ng／ml，环丙沙星、氧氟沙星、庆大霉素、青霉素钾和磺胺嘧啶五种药物的I50均高于3000ng／ml，它们与ENR的交叉反应率均低于0.54％，即抗血清与其它氟喹诺酮类药物和 摘要目巨绝里互旦目里口口级组口旦亘旦巨旦旦口国旦国纽里皿里旦抗生素均无交叉反应性。ENR在鸡肌肉、肝脏和肾脏中的150分别为63.97，45.92和50.47ng/ml。ENR在肌肉、肝脏、肾脏和PBS中的标准回归方程式分别为Y二76.720一14.792X（r=一0.976，n=16），Y=75.807一15.525X（r=一0.981，n=16），Y=74.631一14.461X（r=一0.992，n=16）和Y=68.006一14.865x（r二一0.997，下16），ENR在鸡肌肉、肝脏、肾脏和PBS介质中标准曲线的线性范围分别为7.823000ng/ml，12.713000ng/ml，8.753000n岁ml和1.623000ng/ml。以上结果说明该方法特异性好，选择性高，灵敏度、精密度和准确度均基本符合残留检测要求。4.由本试验建立的Ci一ELISA检测鸡组织中ENR残留，结果为休药第2天，鸡组织（肌肉、肝脏和肾脏）中ENR的残留量为30300ng/g，而且肝脏和肾脏的残留量均高于肌肉;休药第6天，肌肉、肝脏和肾脏的残留量都在33Ong/g之间;休药第10和14天，检测结果表明肌肉、肝脏和肾脏中ENR残留量都在3ng/g以下。说明给肉仔鸡连续4天口服10mg/kg体重剂量的ENR上市前至少需休药6天，以避免该类抗菌药在肉仔鸡体内的残留。 研究表明，本实验室建立的检测鸡组织中ENR残留的Ci一ELISA是一种特异性良好，简便且价廉的方法。