【摘 要】
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非洲猪瘟（African swine fever,ASF）是我国近年外来新发的重大动物疫病,其发病时间短,病死率高。当前尚无有效的疫苗用于ASF的防控,严重威胁全球生猪养殖业发展。因此研发特异性强、灵敏度高、安全性好的检测方法和试剂,对病毒早期的诊断、监测具有重要意义。本研究通过对CP204L基因的生物信息学分析,构建了p ET-28a-CP204L原核表达载体及pc DNA3.1-CP204L真
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非洲猪瘟（African swine fever,ASF）是我国近年外来新发的重大动物疫病,其发病时间短,病死率高。当前尚无有效的疫苗用于ASF的防控,严重威胁全球生猪养殖业发展。因此研发特异性强、灵敏度高、安全性好的检测方法和试剂,对病毒早期的诊断、监测具有重要意义。本研究通过对CP204L基因的生物信息学分析,构建了p ET-28a-CP204L原核表达载体及pc DNA3.1-CP204L真核表达载体。对p30蛋白进行原核表达、纯化以及单克隆抗体制备。结果表明:原核表达载体p ET-28a-CP204L成功表达了含有6×His标签的p30融合蛋白。经SDS-PAGE显示,获取到单一的目的条带,能够与His标签抗体结合。纯化后的p30蛋白免疫小鼠,抗体效价达到1:102400。制备的杂交瘤细胞经ELISA方法筛选,最终获得5株稳定分泌p30蛋白抗体的阳性细胞株,单克隆抗体亚型鉴定为Ig G1、Ig G2a型。Western Blotting结果显示,筛选的5株单克隆抗体能与p30蛋白特异性结合。IFA结果显示筛选的单抗与真核质粒pc DNA3.1-CP204L表达的p30蛋白结合、且能与ASF全病毒抗原结合,具有良好的反应原性。
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