层状双金属氢氧化物对蛋白疫苗免疫增强作用的研究

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层状双氢氧化物(LDH)纳米载体因其特殊的板层结构与性质在药物载体、基因传递、纳米疫苗中的应用研究越来越受关注。本文以LDH材料的可控制备为基础,通过模式蛋白OVA与LDH的复合过程分析纳米载体对蛋白的携载能力及影响因素,并对LDH免疫增强作用进行验证。首次将LDH作为脱毒百日咳单抗原PTd佐剂,从佐剂免疫剂量、免疫类型等方面进一步分析其免疫增强效果及可能机制。LDH纳米粒的制备与表征结果表明,共沉淀法可以合成出分散均匀、粒径可控的正六角边形纳米晶体,在4℃共沉淀、100℃水热晶化16 h条件下可以获得平均粒径100 nm、层间距0.764 nm的LDH稳定分散体系。蛋白组装及免疫效果实验表明,OVA蛋白通过与LDH层板的静电相互作用而吸附于带正电荷的层板表面。通过改变吸附条件发现在4 h内,OVA溶液pH为10时,LDH吸附蛋白OVA的能力较强,增加颗粒比表面积,可以增加蛋白的吸附量。在模式抗原的免疫中,LDH纳米粒发挥了持续性的免疫增强效果。百日咳单抗原PTd的免疫实验表明,LDH在280 ug/剂的剂量下即产生与350 ug/剂的氢氧化铝相同的免疫增强效果。同时,LDH:PTd比例在8:1至12:1范围内,LDH免疫佐剂活性在5周内未见剂量依赖性。基于分型抗体的检测,证明了微米级别的LDH蛋白复合物与铝佐剂相同,主要为增强特异性体液免疫应答的佐剂活性。LDH作为蛋白疫苗佐剂的研究报道较少,本文的研究结果为LDH作为蛋白疫苗佐剂的应用提供了依据,具有重要的研究意义。
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