PiT2(Sodium dependent phosphate transporter 2,钠磷共转运体蛋白2)具有12个跨膜区,包含两个PD结构域和一个胞内结构域(被称为loop7结构域)。PD结构域对无机磷的转运起重要作用,loop7结构域可参与调控神经发育,但是loop7结构域在其它组织中的功能尚不清楚。已有研究表明,胎盘钙化是胎盘组织中钙磷酸盐矿物的沉积,PiT2缺失后可导致小鼠胎盘钙化,但是胎盘钙化产生的具体机制尚不清楚。为了探索Slc20a2敲除小鼠胎盘钙化的机制,应用酵母双杂交筛选与PiT2相互作用的蛋白,期望在分子水平上揭示胎盘钙化的致病机制。本研究以小鼠PiT2的loop7结构域作为诱饵,利用酵母双杂交技术对小鼠E8.5-E18.5天胎盘cDNA文库进行筛选。初步筛选到128个克隆,经过X-α-gal严谨筛选获得72个阳性克隆。对阳性克隆进行测序分析和回转验证,初步发现PiT2的loop7结构域与腓骨蛋白5(Fibulin 5,FBLN5)、尿苷单磷酸/胞苷单磷酸激酶(Uridine monophosphate/Cytidine monophosphate kinase,CMPK1)、半乳糖凝集素1(Galectin1,GAL1)和激酶A相互作用蛋白1(A kinase interacting protein 1,AKIP1)可能存在相互作用。FBLN5是FBLN家族中细胞外基质糖蛋白5,已有研究发现FBLN5与细胞表面的整合素结合影响细胞内活性氧的产生,且其同家族的FBLN3可抑制血管钙化,推测FBLN5可能影响胎盘钙化的发生。因此,本研究主要对PiT2与FBLN5相互作用关系进一步研究,探讨二者互作在胎盘钙化中的作用机制。通过GST-pulldown、免疫共沉淀和免疫荧光发现PiT2与FBLN5在HEK293细胞中确存在相互作用。通过提取小鼠胎盘蛋白进行Western blot和免疫组化体内证实PiT2与FBLN5在小鼠胎盘中存在相互作用。总之,本研究通过酵母双杂交系统首次在小鼠胎盘中发现与PiT2相互作用的四种蛋白FBLN5、CMPK1、GAL1和AKIP1,进一步体外和体内验证显示PiT2与FBLN5存在相互作用。本研究对PiT2与FBLN5互作在胎盘钙化中作用机制的进一步探讨,为研究胎盘钙化的分子机制提供重要的理论基础。