钙网蛋白（Calreticulin，CRT）是一种内质网蛋白，由Thomas J. Ostwald等1974年首次从兔的基质网中分离出来。CRT是一个酸性的Ca2+结合蛋白，分子量约为46kD，分为N、P、C三个结构域。N和P连接部位为该蛋白发挥分子伴侣功能的重要区域，C端是一个酸性结构区域，结合有大量的Ca2+，被誉为细胞内的“钙库”。近年来的研究表明，CRT还存在于内质网以外并发挥着重要的生物学功能，诸如参与适应性免疫的抗原加工和递呈、抗肿瘤免疫应答、介导凋亡细胞的吞噬、细胞的粘附和迁移以及免疫细胞的增殖和活化等。为了进一步研究CRT的免疫生物学活性，我们以新鲜鼠肝作为原材料，利用硫酸铵沉淀和DEAE阴离子交换层析等方法从收集的鼠肝细胞中纯化得到天然钙网蛋白（Native calreticulin, N-CRT）。同时，我们还利用大肠杆菌系统表达了重组钙网蛋白（Recombinant calreticulin, rCRT）,并用Ni+柱对其进行纯化，得到了较高纯度的蛋白。因为rCRT存在较大量多聚体的情况，我们利用凝胶过滤的方法对其进行了分离，得到了rCRT多聚体（PrCRT）， rCRT单体Ⅰ（MrCRTⅠ），rCRT单体Ⅱ（MrCRTⅡ）等三个组分。在此基础上，我们对上述几种成分刺激腹腔巨噬细胞(PMC)的活性进行了研究，发现rCRT和PrCRT具有很强的刺激细胞产生NO、TNF-α和IL-6的活性，而N-CRT、MrCRTⅠ和MrCRTⅡ的活性则相对较弱。鉴于多聚体强烈的功能可能受到原核表达系统中内毒素的污染，我们利用N-CRT研究了其与LPS可能存在的协同刺激活性。结果表明，N-CRT不能和LPS结合，也不具有协同增强LPS活性的功能。我们还利用N-CRT，rCRT，PrCRT，MrCRTⅠ，MrCRTⅡ分别免疫了C57BL/6小鼠，分析其刺激小鼠产生抗体的情况。结果表明，N-CRT，MrCRTⅠ，MrCRTⅡ均不能免疫小鼠产生特异性的抗体，而rCRT和PrCRT均能产生高滴度的特异性抗体。综上所述，我们发现CRT具有刺激巨噬细胞产生促炎症因子的功能，并且PrCRT具有很强刺激功能，这种功能与LPS没有直接关系，在小鼠免疫试验中也证实了这一结果。鼠源的N-CRT以及rCRT单体免疫小鼠均不能产生特异性的抗体，而多聚体则具有极强的免疫原性。这些发现为我们进一步研究CRT的生物学活性提供了有价值的线索。