论文部分内容阅读
目的:研究叉头框转录因子-1(FoxO1)对慢性血栓栓塞性肺动脉高压(CTEPH)大鼠模型肺动脉内皮自噬的影响。方法:大鼠分为正常对照组和实验组,实验组又分为单纯血栓组,FoxO1激动剂处理组,Fox O1抑制剂处理组。实验组将大鼠自体血栓经左颈外静脉重复注入肺动脉以诱导CTEPH动物模型,正常对照组以等量生理盐水替代自体血凝块注入。每组再根据不同时间分为2周、4周、8周三个亚组。Fox O1激动剂处理组以白藜芦醇(Res)10mg/kg/d灌胃,持续2周,Fox O1抑制剂处理组以AS1842856 30mg/kg灌胃,2周内给完,单纯血栓组以等量生理盐水灌胃。饲养2周、4周、8周后分别测定肺动脉压力。分离大鼠肺动脉,观察大鼠肺组织病理和检测大鼠肺动脉管壁面积/管总面积(WA/TA)。免疫组化法观察肺动脉内皮Fox O1、p Fox O1、LC3、Beclin1抗原表达变化,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定肺动脉Fox O1m RNA及自噬指标LC3 m RNA和Beclin1 m RNA的含量,蛋白质印记(western blot)法测定肺动脉Fox O1、p Fox O1、LC3、Beclin1蛋白表达,并进行比较和相关性分析。结果:单纯血栓组和抑制剂组大鼠平均肺动脉压力(m PAP)、肺动脉WA/TA随着时间延长升高,且都高于正常对照组,差异具有统计学意义(P<0.05),抑制剂组m PAP和肺动脉WA/TA高于对应单纯血栓组,差异具有统计学意义(P<0.05),但8w组m PAP差异无统计学意义(P>0.05)。激动剂组m PAP和肺动脉WA/TA随着时间延长升高,但升高幅度下降,低于对应单纯血栓组但高于对应正常对照组。Fox O1 m RNA、LC3 m RNA和Beclin1 m RNA表达在正常对照组表达无差异,在单纯血栓组和抑制剂组表达随着时间延长表达下降,且都高于对应正常对照组,差异具有统计学意义(P<0.05),激动剂组Fox O1 m RNA、LC3 m RNA和Beclin1 m RNA表达随着时间延长升高,但低于正常对照组,2周、4周组比较差异具有统计学意义(P<0.05),8周组比较差异无统计学意义。Fox O1、p Fox O1、LC3和Beclin1蛋白表达在单纯血栓组在抑制剂组表达随着时间延长下降,且低于对应正常对照组,差异具有统计学意义(P<0.05),Fox O1、p Fox O1、LC3和Beclin1蛋白表达在激动剂组随着时间延长表达升高,且高于对应单纯血栓组和抑制剂组,差异具有统计学意义(P<0.05),但低于对应正常对照组,2周、4周组比较差异具有统计学意义(P<0.05),8周组差异无统计学意义。p Fox O1蛋白表达与m PAP呈负相关(r=﹣0.967,P<0.05),与Fox O1(r=0.972,P<0.05)、LC3(r=0.871,P<0.05)、Beclin1(r=0.953,P<0.05)蛋白表达呈正相关。结论:CTEPH大鼠肺动脉内皮自噬功能下降。Fox O1激动剂Res可以降低CTEPH大鼠肺动脉压力,增强肺动脉内皮自噬功能,改善CTEPH大鼠肺动脉内皮重塑。Fox O1抑制剂AS1842856可以升高CTEPH大鼠肺动脉压力,降低肺动脉内皮自噬功能,增强CTEPH大鼠肺动脉内皮重塑,提示Fox O1可能参与CTEPH内皮重塑的过程,与CTEPH发生发展有关。