【摘 要】
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莴苣(Lactuca sativa)起源于地中海沿岸,其野生种为Lactuca serriola。为了防止动物以及昆虫的取食,野生莴苣大部分存在自我保护机制—“刺”,而这一性状在驯化过程中丢失。通过调查实验室莴苣种质资源,发现刺存在莴苣的两种器官,即叶脉和茎。第一种为叶脉和茎同时存在的刺;第二种仅在叶脉中存在的刺。为了克隆控制叶脉和茎的刺形成基因,分别利用了不同的茎刺和叶刺分离群体进行定位。实验室
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莴苣(Lactuca sativa)起源于地中海沿岸,其野生种为Lactuca serriola。为了防止动物以及昆虫的取食,野生莴苣大部分存在自我保护机制—“刺”,而这一性状在驯化过程中丢失。通过调查实验室莴苣种质资源,发现刺存在莴苣的两种器官,即叶脉和茎。第一种为叶脉和茎同时存在的刺;第二种仅在叶脉中存在的刺。为了克隆控制叶脉和茎的刺形成基因,分别利用了不同的茎刺和叶刺分离群体进行定位。实验室前期对控制茎刺形成的基因进行了精细定位,定位在5号染色体的306.31Mb—307.31Mb,根据栽培基因组注释,该区段内的基因功能注释与已报道刺相关的基因均不同。为此,我们利用PI491245×W111的F4:5分离群体的2,000株重新进行定位。重定位后发现控制茎刺形成的基因仍然定位于该区域,但定位区间比之前定位扩大了约1Mb,定位于305.22Mb—307.26Mb。通过分析定位区段基因功能注释、LncRNA序列差异、候选基因编码区序列差异、基因表达差异等方面,确定了一个与细胞分裂相关的基因(Cell division protein ftsZ),该基因不在前期研究确定的候选区段但在本研究的候选区域内,该基因在茎刺池与无刺池存在表达量的差异。构建该基因超量表达载体,转化无刺莴苣C20,获得T0代转基因植株。在T0代植株中,部分转基因植株在叶脉上出现了刺的表型,该基因的表达量有一定的升高,推测该基因在表达量较低时只能出现叶刺性状,而不能形成茎刺性状。在叶刺分离R37群体中存在叶脉刺有无的分离。在该群体中等量取20株叶脉有刺植株叶片混合成有刺极端池,等量取20株叶脉无刺植株叶片混合成无刺极端池,提取RNA,送公司进行二代测序。利用实验室已经开发的分析BSR-seq脚本,发现至少存在4个以上的位点控制叶刺的形成,其中在5号染色体上存在一个与控制茎刺形成一致的位点,分子标记验证定位区段与控制茎刺形成为同一位点。在第6、8、9号染色体上也存在控制叶刺形成的位点。本研究为生菜刺形成控制基因的克隆奠定了良好基础,可以丰富生菜的驯化研究。
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