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榆黄蘑(Pleurotus citrinopileatus),又名金顶侧耳,在分类学上属于真菌门(Eumycophyta),担子菌亚门(Basidiomycotina),层菌纲(Hymenomycetes),伞菌目(Agaricales),侧耳科(Pleurotaceae),侧耳属(Pleurotus)。榆黄蘑不仅营养丰富、经济价值高,而且富含糖类、蛋白质、微量元素、酶、膳食纤维和维生素等多种生物活性物质。榆黄蘑子实体及液体发酵产物均具有抗氧化、抗肿瘤、降血压、免疫调节、抗疲劳和抗菌等作用。本课题通过Plackett-Burman(PB)和响应面(response surface methodology,RSM)试验等方法对榆黄蘑SM-01菌株的胞外多糖(exopolysaccharide,EPS)和胞内多糖(intracellular polysaccharide,IPS)的提取条件进行了优化,并对EPS和IPS的体外抗氧化活性和体内抗氧化活性进行了测定。(1) EPS提取优化PB结果表明,EPS最优提取条件为浓缩温度70°C,浓缩倍数3,醇沉时间18h,醇沉温度8°C,乙醇倍数3,乙醇浓度80%,pH7,提取温度70°C,提取时间2h。在此条件下,EPS提取量为4464.79mg/L。方差分析显示,醇沉时间、浓缩倍数和pH对EPS提取量的影响最显著。RSM试验表明,醇沉时间为14.32h、浓缩倍数2.13、pH7.44时,EPS的理论提取量为5643.96mg/L。考虑操作方便,选取醇沉时间15h,pH8,浓缩倍数2,EPS的理论提取量为5481.69mg/L,与试验值相符(5479.75mg/L)。(2) IPS提取优化PB结果表明,IPS最优提取条件为加水倍数20,pH9,超声功率400W,超声时间800s,提取温度90°C,提取时间1h,乙醇浓度90%,乙醇倍数4,醇沉时间12h,醇沉温度-4°C。在此条件下,IPS得率达到11.71%。影响IPS得率最显著的3个因素为醇沉时间、超声时间和pH。RSM结果显示,IPS最优提取条件为醇沉时间23.03h,超声时间664.09s,pH7.36,IPS的理论得率为16.13%。考虑操作方便,选取醇沉时间23h,超声时间660s,pH7.5,IPS的理论得率为16.11%,与试验值相符(16.08%)。(3) EPS体外抗氧化活性EPS浓度为5g/L时,EPS对超氧阴离子自由基、羟基自由基、DPPH的清除率分别为53.10%、79.90%、69.07%,分别比BHT高14.71%、44.64%和22.73%。EPS的还原力为0.787,比BHT高0.257。结果表明,榆黄蘑胞外多糖对超氧阴离子自由基、羟基自由基和DPPH有一定的清除作用,具有较强的还原力,说明榆黄蘑的胞外多糖具有较强的体外抗氧化活性。(4) IPS体外抗氧化活性IPS浓度为5g/L时,对超氧阴离子自由基、羟基自由基、DPPH的清除率分别为73.96%、69.2%和50.75%,分别比BHT高72.56%、22.83%和43.93%。IPS的还原力为0.9,比BHT高69.81%。结果表明,榆黄蘑胞内多糖对超氧阴离子自由基、羟基自由基、DPPH有较好的清除作用,具有较强的还原力。(5) EPS体内抗氧化活性分别对小鼠全血、心、肝、脾和肾中谷胱甘肽过氧化酶(glutathione peroxidsade,GSH-Px)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、谷丙转氨酶(alanineaminotransferase,ALT)、过氧化氢酶(catalase,CAT)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)等五项指标进行了检测。小鼠血液中GSH-Px、SOD、ALT和CAT活性分别为224.69U/mL,421.98U/mL,30.07U/mL,69.52U/mL;MDA含量为8.47nmol/mL。结果表明具有较强的体内抗氧化能力。(6) IPS体内抗氧化活性小鼠血液中GSH-Px、SOD、ALT、CAT分别为241.38U/mL,454.95U/mL,60.32U/mL和32.3U/mL;MDA含量为9.54nmol/mL。IPS能显著提高体内GSH-Px、SOD、ALT和CAT活性,降低MDA含量,具有较强的体内抗氧化能力。