背景:颌面部的肿瘤、腭裂、外伤、牙周病、根尖周病等疾病都会导致口腔中的骨组织缺损,对预后和后期的修复治疗造成不利影响。在这些情况下如何争取骨组织的再生,尽可能的恢复功能和美观是口腔医生面临的重要课题。组织工程作为促进新组织形成、缺失组织重建的技术,是实现口腔骨组织再生十分理想的方法。牙周膜干细胞（periodontal ligament stem cells,PDLSCs）除了具有较好的自我更新能力、多向分化能力以外,还具有优异的免疫调节能力,是口腔骨组织工程中理想的种子细胞,如何提高PDLSCs的成骨能力也是研究的热点之一。液态浓缩生长因子（liquid phase concentrated growth factors,LPCGF）是利用差速离心的方法制取的新一代的血小板浓缩物,内含丰富的血源性生长因子、血小板、白细胞以及CD34+细胞,理论上具有良好的成骨潜力,但目前针对LPCGF的体外研究较为少见,LPCGF对PDLSCs成骨作用产生的影响也未被阐明。目的:本课题拟通过体外实验,研究液态浓缩生长因子对人牙周膜干细胞（human periodontal ligament stem cells,hPDLSCs）增殖能力、迁移能力以及成骨能力的影响;再选用胶原海绵（collagen sponge,CS）作为支架,在体外构建组织工程复合物,探索在该支架上LPCGF对hPDLSCs增殖和成骨能力的影响,为LPCGF、hPDLSCs联合CS应用于口腔骨组织工程中建立一定的实验基础。方法:（1）采用酶消化组织块法联合有限稀释法分离培养纯化hPDLSCs,通过免疫组化染色确定细胞来源;CCK-8和平板克隆检测细胞的自我更新能力;通过染色检测成骨、成脂、成软骨三系分化能力。（2）抽取健康志愿者血液制备LPCGF并进行大体观察,确定LPCGF促进hPDLSCs增殖的最佳浓度。划痕实验、Transwell实验检测最佳浓度的LPCGF对hPDLSCs迁移的影响。（3）在成骨诱导后进行碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）染色、茜素红染色以及ALP活力的测定。实时荧光定量聚合酶链反应（quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR）检测成骨相关基因ALP、OCN、COL-1、BMP-2、RUNX-2的表达,以检测最佳浓度的LPCGF对hPDLSCs成骨作用的影响。（4）以CS为支架培养细胞,利用CCK-8法和qRT-PCR法探索LPCGF对CS支架上三维培养的hPDLSCs增殖和成骨能力的影响。结果:（1）在体外分离培养的细胞,通过免疫组化染色确定其来源于间充质,而非上皮;且具有良好的克隆能力以及成骨、成脂、成软骨三系分化能力,结合所得细胞的形态以及细胞增殖能力的检测,确定所得细胞为hPDLSCs。（2）收集志愿者静脉血至无任何添加物的白盖采血管中,按照Medifuge离心机预设的CGF程序离心,获得的LPCGF初始为淡黄色透明液体,在室温或更高温度下可向固态转换。低浓度（5%、10%、15%、20%）的LPCGF对hPDLSCs的增殖均有促进作用,浓度为5%的LPCGF促增殖效果最为显著,且可以在垂直和水平方向促进细胞的迁移。（3）5%LPCGF对hPDLSCs的成骨能力有促进作用,可以显著提高成骨相关基因ALP、OCN、COL-1、BMP-2、RUNX-2的表达。（4）5%LPCGF可以促进CS支架上三维培养的hPDLSCs的增殖,并且能显著提高成骨相关基因ALP、COL-1、BMP-2、RUNX-2的表达。结论:本课题所进行的研究表明:5%LPCGF在二维培养中可以促进hPDLSCs增殖、迁移和成骨能力,利用CS、LPCGF和hPDLSCs在体外构建的组织工程复合物,也具有良好的增殖和成骨潜力,有望在未来应用于口腔骨组织工程中。但体内存在更加复杂的内环境,细胞、生长因子、支架之间的作用受多种因素的影响,该复合物是否在体内也拥有一致的作用,以及5%的浓度是否是体内环境的最佳浓度,仍需要进行更完善的研究。