银杏蜜环口服溶液中多糖的质量标准研究

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针对银杏蜜环口服溶液的原有标准WS1-XG-004-2001中银杏蜜环口服溶液及其原药材蜜环菌粉中多糖鉴别方法缺乏专属性及其含量测定误差大的问题,本文运用改良硫酸-苯酚法搭载酶标仪测定法与PMP-柱前衍生高效液相色谱法(HPLC)对银杏蜜环口服溶液中多糖进行了质量控制研究,为银杏蜜环口服溶液标准再提高和多糖类药物质量控制提供思路和解决方法。针对传统硫酸-苯酚法测定总糖含量操作繁琐、重复性及可比性差等缺点,提出改良硫酸-苯酚法搭载酶标仪测定方法,并运用该方法测定市售银杏蜜环口服溶液、自制口服溶液及其原药材银杏叶提取物(5个不同厂家)、蜜环菌粉(2个不同厂家)、甜菊糖、苯甲酸钠总糖含量,结果表明:口服溶液中糖含量来源于银杏叶提取物、蜜环菌粉及辅料甜菊糖三部分。另外,运用PMP-柱前衍生高效液相色谱法,测定银杏蜜环口服溶液及其组方中原药材单糖组成,结合中药指纹图谱相似度软件,构建对应特征图谱发现:口服溶液的单糖组成为甘露糖(Man)、鼠李糖(Rha)、葡萄糖(Glc)、半乳糖(Gal)和阿拉伯糖(Ara);E厂家与其他4个厂家的银杏叶提取物单糖组成存在较大差异;G厂家蜜环菌粉单糖组成与口服溶液单糖组成不一致。进一步提取银杏蜜环口服溶液多糖及原药材多糖,再分别从鉴别(从相对分子量分布测定、单糖组成、红外鉴别、糖苷键分析四个方面进行控制)、检查、含量测定三个方面进行质量控制,构建起银杏蜜环口服溶液多糖质量草案。经鉴别,银杏蜜环口服溶液多糖及蜜环菌粉多糖单糖组成一致,均由甘露糖、半乳糖、葡萄糖、鼠李糖和阿拉伯糖组成,摩尔比有所差异;红外图谱显示,口服溶液多糖及蜜环菌粉多糖的特征吸收峰为3300cm-1、2900cm-1、1600cm-1、1400cm-1、1100cm-1、1000cm-1、550cm-1;糖苷键分析表明:口服溶液多糖糖苷键主链为→1)Glc(4→和→1)Gal(6→连接,在葡萄糖6位含有葡萄糖支链,端基为葡萄糖,而蜜环菌粉多糖糖苷键主链为→1)Glc(4→,在葡萄糖6位含有葡萄糖支链,端基为葡萄糖。即不同来源原药材会造成市售口服溶液多糖与自制口服溶液多糖单糖组成摩尔比、相对分子量、糖苷键连接差异。结合现行质量标准——2020版《中国药典》,对银杏蜜环口服溶液中原药材甜菊糖、苯甲酸钠、银杏叶提取物(5个不同厂家)进行质量控制研究发现,市售口服溶液中含有药用辅料甜菊糖及防腐剂苯甲酸钠,其含量均为3g/L;仅E厂家银杏叶提取物不符合药典标准,与上文原药材中银杏叶提取物单糖组成结果相对应。综上,通过对银杏蜜环口服溶液原药材进行质量控制,进一步表明本实验室自制口服溶液与市售口服溶液一致,所得结果准确可靠,建立的改良硫酸-苯酚法搭载酶标仪测定方法,适用于企业生产需求;提出的柱前衍生高效液相色谱法可作为银杏蜜环口服溶液及其原药材鉴别补充项。为银杏蜜环口服溶液质量控制提供了思路和方法。
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