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猪伪狂犬病（Pseudorabies,PR）是由伪狂犬病病毒（Pseudorabies virus,PRV）感染引起的一种广泛流行的急性传染病,是多种家畜及野生动物共患的疾病,其主要特征:发热、奇痒（除猪外）、呼吸及神经系统疾病,以及妊娠母猪的流产或死胎。在我国很多猪场都存在该病,到目前为止,还没有有效治疗的药物,所以疫苗预防仍是防控伪狂犬病发生的主要措施之一。但是疫苗接种并非万能,从2011年下半年开始,我国多地发生了猪伪狂犬病的流行,且这些地区都是接种疫苗的猪群,此次出现的伪狂犬病病毒株为变异株,各年龄段的猪皆可致病,可能暗示某些商品疫苗似乎不能对当前流行的变异株提供完全保护。本研究对我国部分地区伪狂犬的流行现状进行了血清学及分子流行病学调查,分析了山东地区2018-2020年猪伪狂犬病的流行趋势及部分伪狂犬病毒变异株的变异情况;评估了当前猪伪狂犬病商品疫苗免疫及实验室自制变异株原型疫苗对变异毒株（variant pseudorabies virus,vPRV）XJ5株在育成猪（1 12日龄）的保护效力;同时评估了三种常用消毒剂在体内外对PRV/Ra株、变异株vPRV/XJ5株的消毒效果及评估方法;在上述研究基础上,通过对某规模猪场淘汰gE抗体阳性猪、改进消毒方式等生物安全措施和优化疫苗免疫程序等综合防控措施,达到了猪伪狂犬病净化的目标。1山东地区猪伪狂犬病流行病学调查2012年以来,猪伪狂犬病的发病呈局部流行的态势,为了从总体上了解山东地区猪场PRV野毒感染情况,本研究应用PRV gE-ELISA抗体检测试剂盒进行PRV gE抗体的检测,以了解山东地区猪场PRV野毒感染情况。对山东各地2018-2020年间共19292份血清进行PRV gE抗体检测,结果发现:2018-2020年受检山东地区猪群gE抗体阳性率由31.20%下降至18.12%,其中,母猪群gE抗体阳性率三年间有小幅波动,但整体变化不大;其他年龄段猪群的gE抗体阳性率以2018年为最高,2019、2020年有所下降,表明山东地区猪群PRV野毒感染率在2018-2020间呈下降趋势。2 PRV分离及部分基因序列分析2020年,从山东部分猪场搜集病料97份,从发病猪的病料中分离出4株猪伪狂犬病病毒变异株,命名为vPRV SD1、vPRV SD2、vPRV SD3、vPRV SD4。对上述毒株的3个糖蛋白基因gE、gC、gI和毒力基因TK进行序列测定,结果显示上述毒株与本室于2014年从江苏一猪场分离的vPRV/XJ5株存在少量变异,且与国内2012年以后分离的其他毒株间差异也较小,但与国外的PRV毒株序列差异较大。3 Bartha K61 疫苗和 rPRV XJ5-gI-/gE-/TK-疫苗在育成猪对 vPRV/XJ5 株的免疫保护作用本实验室2014年从江苏某发病猪场分离到1株伪狂犬病毒变异株,命名为vPRV/XJ5株,对该变异株进行三基因缺失获得rPRV XJ5-gI-/gE-/TK-原型疫苗株。本研究旨在研究12周龄育成猪免疫猪伪狂犬病商品活疫苗（Bartha K61株,1×106.0 TCID50）、vPRV/XJ5三基因缺失苗（rPRV XJ5-gI-/gE-/TK-株,1×106.0 TCID50）后,对伪狂犬病变异毒株XJ5（4×106.0TCID50）致死性攻击的保护效果。商品疫苗免疫组、rPRV XJ5-gI-/gE-/TK-三基因缺失苗免疫后7 d均可检测到gB抗体;攻毒后,攻毒对照组攻毒后出现典型伪狂犬病症状,7 d内死亡率为100%,所有攻毒对照猪鼻拭子、肛拭子中均检出vPRV/XJ5株排毒,死亡猪只扁桃体、脑、肺均有出血、淤血等病变;免疫商品疫苗、rPRVXJ5-gI-/gE-/TK-三基因缺失苗的猪攻毒后,均未出现伪狂犬病特异症状,部分猪只鼻拭子、肛拭子检出排毒,与攻毒对照猪相比,排毒持续时间短,排毒量显著减少,所有免疫攻毒猪肺部未见明显病变,均未见死亡。结果表明:伪狂犬病商品活疫苗（Bartha K61株）对PRV变异株的致死性攻击具有较好的保护效果,在1×106.0 TCID50免疫剂量下,仍具有较高保护率;同等剂量rPRV XJ5-gI-/gE-/TK-三基因缺失苗与Bartha K61商品活疫苗具有同等保护力。因育肥猪感染猪伪狂犬病变异株后仍可发病,现阶段有必要选择高效价商品疫苗免疫。4市售消毒剂对vPRV/XJ5株和经典株的消毒效果评价为了解市售消毒剂对PRV的消毒效果,分别在细胞和小鼠感染模型上评价了市售消毒剂对PRV的灭活效果。以vPRV/XJ5株和经典株（PRV/Ra株）为材料,以市售的3种常用消毒剂为研究对象,从有效浓度、消毒温度、作用时间等因素从体外、体内两个维度评估了消毒剂的消毒效果。结果显示,戊二醛溶液、过硫酸氢钾复合物对受试的PRV经25℃灭活25-30 min,均不能引起小鼠发病或细胞病变,0.01%戊二醛与0.025%的过硫酸氢钾复合物可充分杀灭受试的2种PRV病毒。癸甲溴铵在体外实验中不能有效杀灭PRV。综上,戊二醛和卫可可作为猪伪狂犬病的有效消毒剂,不建议癸甲溴铵用于该病的消毒。5规模化猪场猪伪狂犬病综合性防控措施的探索通过对河南泌阳某规模猪场2017-2020年间采取持续检测gE抗体、淘汰gE抗体阳性猪、落实生物安全、优化免疫程序等猪伪狂犬病综合性防控措施,最终实现猪场由PRV 阳性场逐步转变为阴性场并保持猪场稳定生产。本实验建立了猪场生物安全现状评估、gE抗体检测及淘汰gE抗体阳性猪的方法及流程;通过每季度监测猪场gB和gE抗体、调整优化免疫程序;坚持逐步淘汰gE抗体阳性猪及严格的生物安全措施等综合举措,构建了规模化猪场猪伪狂犬病的综合防控体系,为规模化猪场PRV的防控提供实践依据。