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目的研究MDS患者与正常人外周血NK细胞的数量、亚型、功能分子和杀伤功能的变化;探讨NK细胞在MDS的发病和疾病进展中所起的作用,也许可以为将来MDS的细胞和靶向治疗提供理论依据。背景骨髓增生异常综合征(Myelodysplastic syndromes,MDS)是一组起源于骨髓造血干细胞的恶性克隆性血液系统肿瘤,以骨髓髓系细胞发育异常、克隆性无效造血、病态造血进而导致的外周血一系或多系血细胞减少为特点,大约1/3的MDS患者最终进展为急性髓系白血病(Acute myelogenous leukemia,AML)。自然杀伤细胞(Natural killer cells,NK细胞)是淋巴细胞的一种,在正常人外周血淋巴细胞中所占比例约为10%-15%,具有早期可产生细胞因子、趋化因子和非致敏即可溶解靶细胞的能力,因此在机体抗肿瘤、抗病毒免疫中具有重要作用。近年来,人们逐渐发现MDS患者中NK细胞数量和功能均存在异常,并与MDS的病情和疾病进展具有相关性。本研究应用流式细胞术检测MDS患者外周血NK细胞的数量、亚型和受体的表达,应用共培养的方法检测NK细胞对靶细胞的杀伤功能,并与MDS患者的的病情和相关临床指标进行相关性分析。方法收集天津医科大学总医院自2015年10月至2016年6月收治的35例MDS患者及34名正常对照者的外周血标本。第一部分应用流式细胞术检测MDS患者和正常对照者外周血NK细胞(CD3-CD56+)、CD56brightNK细胞(CD3-CD56brightCD16-)、CD56dimNK细胞(CD3-CD56dimCD16+)、T细胞(CD3+)、NKT细胞(CD3+CD56+)的数量,NK细胞的两个亚型即CD56brightNK细胞、CD56dimNK细胞的构成比及CD56brightNK细胞/CD56dimNK细胞;检测NK细胞表面的功能分子NKp30、NKp46、NKG2A的表达情况;检测MDS患者治疗前后NK细胞的数量和功能分子有无变化;根据MDS不同危险度分层进行分析;并与骨髓分类中骨髓原始细胞百分比、外周血中性粒细胞绝对值(ANC)、血红蛋白含量(Hb)做相关性分析。第二部分收集7例MDS患者和8名正常对照者新鲜抗凝外周血,应用免疫磁珠法分选出CD3-CD56+NK细胞,体外应用高浓度IL-2刺激过夜培养后与靶细胞(K562细胞)进行共培养,6h后,收获细胞并标记PI,应用流式细胞术检测NK细胞杀伤功能。结果第一部分(1)NK细胞数量:MDS组NK/Lym%、CD56dimNK/Lym%显著低于对照组,分别为(8.19±5.30 vs 13.81±5.96,P<0.001)、(7.95±5.14 vs 12.78±5.74,P=0.001);MDS组CD56brightNK/Lym%高于对照组(0.68±0.33 vs 0.53±0.22,P<0.05);MDS组NKT/Lym%、T cells/Lym%与对照组无显著差异,分别为(1.46±1.30 vs 1.87±1.33,P=0.198)和(66.70±16.38 vs 67.09±9.90,P=0.907);分析NK细胞亚型,MDS组CD56dimNK/NK%明显低于对照组(91.12±3.49 vs 95.40±2.48,P<0.001);CD56brightNK/NK%明显高于对照组(8.87±3.49 vs 4.60±2.48,P<0.001);MDS组CD56brightNK/CD56dimNK%细胞明显高于对照组(9.90±4.29 vs4.89±2.77,P<0.001);MDS组NK细胞、CD56dimNK、CD56brightNK细胞的绝对值(/ul)均低于对照组,分别为(125.16±94.39 vs 295.86±119.12,P<0.0001)、(127.88±103.00 vs 281.34±136.53,P<0.0001),(10.83±4.53 vs 6.24±4.66,P<0.001)。(2)NK细胞表面功能分子的表达:MDS组NK细胞表面NKG2A的表达与对照组无明显差异(37.31±19.60 vs 37.45±14.24,P﹥0.05);而活化性受体NKp30和NKp46的表达明显低于对照组,分别为(74.35±15.36 vs 84.89±8.73,P=0.001)、(77.79±15.30 vs 89.63±9.12,P<0.001)。(3)3例MDS患者治疗后,随着病情好转,NK/Lym%、CD56dimNK/Lym%逐渐恢复,随着病情进展,NK细胞数量进一步下降。(4)在MDS组中,高危组NK/Lym%、CD56dimNK/Lym%明显低于低危组(5.41±0.97 vs 10.13±1.83,P=0.04)、(4.64±0.94 vs 8.81±1.14,P=0.02);而高危组与低危组NKG2A、NKp30、NKp46的表达无明显差异,分别为(31.97±2.74 vs 44.71±9.16,P=0.16)、(71.26±5.11 vs 77.44±6.81,P=0.47)、(75.70±6.46 vs 78.70±5.28,P=0.74)。(5)MDS患者NK细胞数量与功能分子的表达与临床指标的相关性:MDS患者NK/Lym%、CD56dimNK/Lym%与患者骨髓原始细胞比例呈负相关(r=-0.53和-0.68,P<0.05),与外周血血红蛋白含量(Hb)呈正相关(r=0.35和0.50,P<0.05);与中性粒细胞绝对值(ANC)呈正相关(r=0.52和0.53,P<0.01);NK细胞表面活化性受体NKp46的表达与骨髓原始细胞数呈负相关(r=-0.584,P<0.05)。第二部分NK细胞与K562共培养后,MDS组K562细胞的凋亡率低于对照组(7.73±4.0 vs 3.14±2.47,P=0.029)。结论:MDS患者NK细胞数量减少,亚型失衡,活化性受体下降,可能导致其活化不足,杀伤功能下降,从而导致其不能正常行使有效的免疫监视功能,进而不能早期有效清除MDS恶性克隆细胞,导致MDS患者病情进展。