【摘 要】
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本研究通过采集盆栽、岩壁附生、梨树附生3种栽培环境铁皮石斛C15品系的根、茎、叶3个部位样品,以及栽培基质的样品,采用传统的组织分离培养法与现代的分子技术16SrDNA、ITS测序法,对铁皮石斛的内生菌及根系环境菌群组成进行测定,研究铁皮石斛内生菌多样性、内生菌与药用成分累积含量的关系,对利用铁皮石斛内生菌提高铁皮石斛抗逆、品质、产量提供理论与物质基础具有重要的意义,取得了如下主要结果:1、铁皮石
【基金项目】
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国家重点研发课题2017YFC1702201
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本研究通过采集盆栽、岩壁附生、梨树附生3种栽培环境铁皮石斛C15品系的根、茎、叶3个部位样品,以及栽培基质的样品,采用传统的组织分离培养法与现代的分子技术16SrDNA、ITS测序法,对铁皮石斛的内生菌及根系环境菌群组成进行测定,研究铁皮石斛内生菌多样性、内生菌与药用成分累积含量的关系,对利用铁皮石斛内生菌提高铁皮石斛抗逆、品质、产量提供理论与物质基础具有重要的意义,取得了如下主要结果:1、铁皮石斛C15品系存在着丰富的内生菌,栽培环境、宿主部位显著影响菌群结构。采用16SrDNA、ITS测序法分别对3种栽培环境铁皮石斛植株叶、茎、根以及环境样品进行细菌、真菌测序,通过OTU聚类分析、Alpha与Beta多样性分析、对比Unite数据库以及RDP数据库进行注释,结果表明:铁皮石斛C15品系存在着丰富的内生真菌和细菌,栽培环境与宿主部位对铁皮石斛C15品系的内生菌群落结构均有显著的影响;同时,通过对铁皮石斛内生菌优势菌种与药用成分的相关性分析,得到了与铁皮石斛药用成分相关的内生菌种类。2、从铁皮石斛C15品系中分离得到1865株内生真菌,归属到真菌界1个门3个纲9个目17个科23个属:采用传统的组织分离培养法从3种环境的植株中分离得到1856株菌株,其中盆栽、岩壁附生、梨树附生分别为397株、791株、677株;根据菌株的培养特征划分为103形态型,其中盆栽、岩壁附生、梨树附生分别为76,85,92形态型;经分子生物学鉴定为51个分类单元,其中盆栽、岩壁附生、梨树附生分别为32,35,40个分类单元,51个分类单元中47个被归属到真菌界1个门3个纲9个目17个科23个属,4个分类单位未确定分类地位。3、初筛得到5株能与铁皮石斛良好共生的内生真菌。将103株铁皮石斛内生真菌与铁皮石斛D211无性系组培苗共培养,每隔7d观察组培苗被菌丝吞没、黄化、死亡等现象,共培养60d后得到5株能与宿主良好共生的内生真菌,分别为C-29（Cytospora sacculus）、C-63（Pezicula neocinnamomea）、C-64（Phyllostict capitalensis）、C-70（Nigrospora chinensis）、C-85（Arthriniumphaeospermum）。
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