研究背景及意义:随着国家“二胎”政策的逐步实行,高龄产妇逐渐增多,加之环境、生活方式、遗传因素等作用,有“问题”的胎儿将出现大幅增长。出生缺陷致残率、发病率、死亡率较高,我国出生缺陷高达5.6%。美国调查显示,每33个婴儿就有一个出生缺陷患儿2013年度出生缺陷相关的治疗费用高达229亿美元,造成严重的经济和社会负担。遗传性疾病是引起出生缺陷的主要原因。目前,对遗传性疾病的产前诊断,根据诊断方法是否对胎儿构成不良影响,可分为侵入性产前诊断和非侵入性产前诊断。侵入性产前诊断对胎儿有一定的危害,且有导致孕妇发生流产的可能。而利用孕妇外周血进行产前诊断,则属于非侵入性的,目前用于包括非整倍体病（比如21-三体综合征,18-三体综合征,13-三体综合征,以及染色体异常等）和单基因遗传病等的诊断。当前临床上已经推广使用的无创产前诊断技术（Non-invasive Prenatal Testing,NIPT）或NIPT-plus是基于孕妇外周血中存在胎儿游离DNA（cell-free fetal DNA,cff DNA）,分析存在于孕妇外周血中的cff DNA以反映胎儿的13,18和21号染色体的情况,主要用于唐氏综合征的筛查,其缺点是由于该技术依赖于测定到的染色体数值进行换算,会产生一定的误差,另外孕妇外周血中出现cff DNA的时间偏晚,并且含量存在较大差异,另外不能够完全排除母体DNA的干扰。大量研究表明,孕妇外周血滋养层细胞完全来源于胎儿,有报道在孕妇怀孕6周（受精龄）,甚至更早的母体血液中就有滋养层细胞的存在,而滋养层细胞的遗传物质与胎儿的遗传物质完全一致,因此从孕妇外周血中分离滋养层细胞用于染色体病和单基因遗传病的诊断成为可能。然而利用外周血滋养层细胞的产前诊断技术尚未得到开发,本实验拟从孕妇外周血中分离滋养层细胞并测序分析,并且把该分析结果与常规的无创产前诊断结果进行比较,以望开发诊断准确率更高,检测时间更短的染色体病和单基因遗传病的诊断技术,为全国新生儿畸形筛查提供有力的技术支持,以望减少缺陷儿的出生,为人类健康提供保障。研究目的:研究孕妇外周血滋养层细胞分离纯化技术用于产前诊断技术的开发研究方法:在知情同意的基础上,选取2017年9月-2019年1月在大理大学第一附属医院妇产科门诊就诊的孕5-7周的孕妇外周血5ml于EDTA抗凝管中,用Chemrus?disposable filter funnel过滤去除孕妇血液细胞成分,分离得到的细胞涂片于微切片上保存备用。依据同一个孕妇在孕12-22周进行NIPT检测及常规孕期检查,NIPT检测有问题的用羊水穿刺确诊。如果两种筛查中任意一种明确胎儿有“问题”,调取来源于同一孕妇早孕期获得的细胞制作的微切片,在显微切割仪下取胎儿来源的滋养层细胞进行单细胞测序并分析。同时进行单细胞测序的患者在胎儿出生时取脐静脉血进行全基因组检测。结果:（1）滋养层细胞分离纯化:14例样本在5-7周进行滋养层细胞分离纯化,细胞进行鉴定,滋养层细胞计数0-1个/HP,每5ml血液共8-10枚滋养层细胞。（2）常规无创产前检测结果:1、2、3、4、5、6、8号病例NIPT检测提示低风险,除了2号病例B超检查正常,出生后皮肤异常,其余病例B型彩色多普勒超声提示胎儿发育异常/畸形,9号病例NIPT检测提示胎儿1号染色体存在chr1:200400000-207150000（1q32.1-q32.1,6.8M）大小6.8M的微重复,B型彩色多普勒超声提示未见异常,7号病例血清学筛查提示,唐氏综合症临界风险,NIPT检测提示胎儿21号染色体异常高风险,外院彩超提示胎儿畸形,但我院彩超未提示畸形。正常对照病例血清学筛查,NIPT检测均提示低风险,彩超检查未见异常。（3）传统侵入性检查结果:9例表现异常的患者中,除了7号、9号病例进行羊水穿刺,其余7位患者拒绝行羊水穿刺检查。（4）测序结果:共有效收集有“异常”表现的胚胎9例,另外收集NIPT和彩超均正常的5例作为对照,结果提示在9例表现异常的患者中,均检测到染色体水平的变异,并且与脐静脉血的检测结果一致。说明孕妇外周血来源的滋养层细胞可以早期检测由于遗传原因导致的胚胎发育异常。结论:滋养层细胞的测序和全基因组测序对胎儿遗传变异的检出率或检出范围均高于NIPT或NIPT-plus检测;滋养层细胞的测序和全基因组测序检出率或者检出范围基本一致。但是由于该研究的样本量小,随访时间短,因此还需要后续研究进一步检测其可靠性和准确性。