Lactobacillus pantheris TCP102胞外多糖的提取纯化和功能特性研究

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乳酸菌胞外多糖(Lactic acid bacteria exopolysaccharide,LAB EPS)是乳酸菌在生长代谢过程中分泌到细胞壁外的荚膜多糖或黏液多糖,是乳酸菌的次级代谢产物。大量研究证明,LAB EPS乍为一种大分子类物质,具有增强免疫细胞免疫效果、抑制癌细胞增殖、抗氧化、抗病毒等功能,具有广阔的应用前景。本课题以Lactobacillus pantheris TCP 102为出发菌株,分离纯化其分泌的胞外多糖,对各组分胞外多糖增强巨噬细胞免疫效果及抑制癌细胞增殖功能进行了系统的研究,得到如下结果:1.对Lactobacillus pantheris TCP 102的产胞外多糖条件包括培养基进行了选择,对发酵时间、温度、初始发酵pH值和接种量分别进行了单因素优化,确定了Lactobacillus pantheris TCP 102的最优产胞外多糖条件为:MRS液体培养基,接种量为4%,发酵液初始pH为7,发酵温度为37℃,发酵时间为30h。测得最终糖产量约为900mg/L2.将得到的TCP 102粗胞外多糖经过DEAE-Sepharose Fast Flow和Sepharose CL-6B两种色谱柱进行分离纯化,得到了三种胞外多糖纯品,将它们分别命名为EPS1、EPS2、EPS3,其中EPS1为中性多糖,EPS2和EPS3为酸性多糖。紫外扫描表明它们均不含核酸和蛋白质。从红外光谱分析可得出,Lactobacillus pantheris TCP102分泌的三种胞外多糖EPS1、EPS2和EPS3均具有多糖的特征吸收峰,存在α型吡喃糖环构型。GPC检测这三种EPS的重均分子量依次是20292Da、22971Da和19301Da。EPS1主要由半乳糖、葡萄糖和甘露糖组成,三者摩尔比葡萄糖:甘露糖:半乳糖为2.86:1.48:1。EPS2主要由半乳糖、葡萄糖和甘露糖组成,三者摩尔比葡萄糖:半乳糖:甘露糖为1.26:1:1。EPS3主要由半乳糖、葡萄糖和甘露糖组成,三者摩尔比半乳糖:葡萄糖:甘露糖为1.80:1.58:1。3.将EPS1、EPS2和EPS3作用于巨噬细胞Ana-1后发现,这三种胞外多糖均能刺激巨噬细胞Ana-1增殖、产生NO、分泌TNF-α和IL-6;用EPS1.EPS2和EPS3刺激小鼠腹腔巨噬细胞后发现,这三种胞外多糖也能同时刺激腹腔巨噬细胞产生NO,分泌TNF-α和IL-6.结果表明,TCP102分泌的这三种胞外多糖对巨噬细胞具有激活作用。4.将EPS1.EPS2.EPS3作用于结肠癌HCT-116、结肠癌Caco-2、卵巢癌A-2780、胃癌BGE-803细胞24、48、72h后发现,这三种胞外多糖对它们的生长均有抑制效果,抑制率随糖浓度和时间的增加而增加,整体抑制率EPS3> EPS2>EPS1。尤其是当EPS3浓度为500μg/mL,抑制时间为72h时,对卵巢癌A-2780的抑制效果最强,抑制率达到72%。
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