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【目的】
在献血者常规筛查工作的基础上,对献血者进行人类T淋巴细胞白血病病毒Ⅰ型或Ⅱ型(HTLV- Ⅰ/Ⅱ)抗体检测,同时追踪调查受血者输血前后HTLV感染情况,以了解广州地区献血人群HTLV-Ⅰ/Ⅱ感染情况和输血传播HTLV的风险度,对用蛋白印迹法(WB)检测阳性者用PCR法进行扩增,以测定HTLV基因序列,比较广州地区HTLV的基因序列与其他代表株的同源性,为探讨HTLV与安全输血的关系和是否对献血者进行HTLV-Ⅰ/Ⅱ检测作为常规检测项目提供重要的参考数据,为预防输血传播疾病提供重要依据。
【方法】
1.采取:ELISA法检测广州血液中心9000例无偿献血者HTLV-Ⅰ/Ⅱ抗体。
2.对200名受血者进行HTLV Ⅰ/Ⅱ抗体检测,再平均分成两组,第一组输注已经HTLV/II抗体筛查的血液,第二组输注未经HTLV-Ⅰ/Ⅱ抗体筛查的血液,1个月后采取ELISA法检测两组受血者输血后HTLV-Ⅰ/Ⅱ抗体。
3.HTLV- Ⅰ/Ⅱ抗体ELISA法检测阳性者用原试剂进行双孔复试,双孔复试阳性者用蛋白印迹法(WB)进行确证。
4.WB确证阳性者重新采集样本5ml,EDTA抗凝,加入Ficoll-Hypaque溶液分离淋巴细胞。
5.分离后的淋巴细胞采用TakaRa公司的DNA抽取试剂盒抽取HTLV-Ⅰ前病毒DNA。
6.设计合成两对引物(env区和LTR区)。
7.对2例阳性标本进行PCR扩增。
8.应用测序仪对PCR阳性产物进行DNA测序。
【结果】
1.9000例无偿献血者标本有10例HTLV-Ⅰ/Ⅱ抗体ELISA初筛呈阳性反应,再用原试剂进行双孔复试只有2例阳性,阳性率为0.02%(2/9000)。
2.200名受血者输血前后HTLV-Ⅰ/Ⅱ抗体均为阴性。
3.这2例阳性标本用WB进行确证,两者均为HTLV-Ⅰ型血清反应阳性。
4.2例阳性标本PCR检测均在720bp(env区)和501bp(LTR 区)处出现反应带。
5.测序结果:两例阳性标本与HTLV-Ⅰ型WHP代表株同源性分别为:
标本1:env区99.3%:LTR区99.0%。
标本2:env区99.4%:LTR区99.2%。
【结论】
1.广州地区献血人群HTLV感染率尚处于一个较低的水平。
2.200名受血者未出现因输血而感染HTLV的情况,说明广州地区通过输血传播HTLV的风险还处于较低的水平。
3.广州地区献血人群2例阳性者均为HTLV-Ⅰ型,广州地区HTLV流行情况以HTLV-Ⅰ型为主,未发现HTLV-Ⅱ型。
4.两例阳性者与HTLV-Ⅰ型WHP代表株同源性均达99%或以上。