骨骼肌卫星细胞是位于肌纤维膜和基底膜之间具有增殖分化潜力的肌源性干细胞。脊柱动物出生后,骨骼肌卫星细胞对骨骼肌的生长发育以及损伤修复具有重要作用。C2C12细胞是小鼠成肌细胞系,被广泛用于成肌过程的研究。miRNA是短链非编码RNA,可通过调控其靶基因发挥重要功能。大量研究表明miR-92a-3p能够调控细胞增殖、迁移和粘附,而miR-92a-3p在成肌细胞中的功能尚未见报道。因此,本研究将对miR-92a-3p在C2C12细胞成肌分化中的作用及机理做初步探究。为明确miR-92a-3p在成肌过程中的功能,本研究通过过表达和干扰miR-92a-3p,研究其对C2C12细胞增殖、分化、迁移、粘附和扩散的作用,使用生物信息学方法预测其靶基因,验证靶向关系后,构建靶基因过表达载体,在C2C12细胞中过表达靶基因,研究靶基因功能并在C2C12细胞中完成功能回复验证。主要研究结果如下:1、miR-92a-3p对C2C12细胞增殖的影响过表达miR-92a-3p后24 h和48 h,通过Ed U和流式细胞技术检测C2C12细胞增殖。结果显示,miR-92a-3p不影响C2C12细胞增殖。2、miR-92a-3p对C2C12细胞分化的影响过表达miR-92a-3p后待C2C12细胞长至汇合,诱导分化,分别于诱导分化3 d、5 d、7 d、9 d进行Myosin免疫荧光,q RT-PCR检测Myogenin和Myosin的相对mRNA水平。结果显示,miR-92a-3p不影响C2C12细胞分化。3、miR-92a-3p对C2C12细胞迁移及相关基因的影响分别过表达和干扰miR-92a-3p后24 h,通过划痕试验和活细胞工作站检测C2C12细胞迁移,粘附试验和扩散试验检测C2C12粘附和扩散,q RT-PCR和Western blot检测相关基因mRNA和蛋白水平。结果显示,miR-92a-3p抑制C2C12细胞迁移、粘附和扩散,抑制Rac1和Cdc42的相对mRNA水平和RAC1的蛋白水平,抑制FAK和Paxillin的磷酸化水平。4、miR-92a-3p靶基因预测和验证使用生物信息学方法预测靶基因,通过双荧光素酶报告系统、q RT-PCR和Western blot验证靶向关系。结果显示miR-92a-3p能够直接靶向Itga6。5、Itga6对C2C12细胞迁移、粘附、扩散及相关基因的影响成功构建了Itga6过表达载体pcDNA3.1-Itga6,在C2C12细胞上成功过表达Itga6,划痕试验、活细胞工作站、粘附试验和扩散试验结果显示,Itga6促进C2C12细胞迁移、粘附和扩散。qRT-PCR和Western结果显示,Itga6促进Rac1、Cdc42的相对mRNA水平和RAC1的蛋白水平,促进FAK和Paxillin的磷酸化水平。6、miR-92a-3p通过靶向Itga6调控C2C12细胞迁移、粘附和扩散及相关基因与共转NC mimics和pcDNA3.1相比,共转miR-92a-3p和pcDNA3.1-EV抑制C2C12细胞迁移、粘附、扩散以及Rac1和Cdc42的相对mRNA水平、RAC1的蛋白水平、FAK和Paxillin的磷酸化水平,而共转miR-92a-3p和pcDNA3.1-Itga6则会将上述结果逆转,逆转程度不会超过共转NC mimics和pcDNA3.1-Itga6所获得的效果,证明miR-92a-3p通过靶向Itga6抑制C2C12细胞的粘附和扩散,抑制Rac1、Cdc42的相对mRNA水平和RAC1蛋白水平,抑制FAK和Paxillin的磷酸化水平从而抑制C2C12细胞迁移。