唐氏综合征即21三体综合征,又称先天愚型,是由染色体异常(多了一条21号染色体)而导致的疾病,是严重影响胎儿智力和身体发育的常见染色体疾病。在我国其发病率约为1/600-1/800,占出生缺陷中染色体疾病的绝大部分比例。近年来国内外对其产前筛查与诊断开展了大量的工作,比较成熟的在各地产前诊断中心开展的是唐氏血清学筛查、遗传学超声检查和羊水穿刺染色体检查。前两者属无创性检查,易于被孕妇及其家庭接受。后者虽然目前属于唐氏综合征的诊断金标准,但因有0.5%-1%的胎儿丢失率而让许多家庭犹豫再三。能否整合利用现有的手段提高唐氏综合征的筛查准确性,减少漏诊率,同时从母血中获取胎儿细胞或遗传物质进行染色体疾病诊断正成为近年来胎儿医学工作者努力的方向。高龄孕妇(advanced maternal age,以下简称AMA)是指分娩年龄大于或等于35周岁的孕妇。随着社会经济发展的进步,高龄孕妇正成为逐步庞大的一个受人关注的群体。为提高出生人口质量,减少唐氏综合症患儿的数量,目前我国对于高龄孕妇一般建议直接在适当的孕周进行羊水穿刺及胎儿染色体检查。实际工作中发现真正愿意主动进行羊水穿刺的高龄孕妇只是极少数。大部分高龄孕妇或由于求子心切,或由于不孕症治疗多年,或由于借助试管婴儿才怀孕等等原因希望避免羊水穿刺。近年国际上建议修正对高龄孕妇直接进行羊水穿刺的决定。因此我们希望通过该课题,建立高龄孕妇唐氏综合征产前的筛查模型及评分系统,在提高筛查准确性的同时,极大减少羊水穿刺的几率。近年利用母血中的胎儿细胞或遗传物质诊断唐氏综合征取得了一定的进展。1997年香港中文大学的Lo教授首先报道母血中存在胎儿DNA,并在随后的研究中利用21号染色体上的一个基因所表达的RNA分子,采用Mass-Array技术,精密计算出胎儿由父亲及母亲遗传下来的RNA分子的比例从而进行唐氏综合征诊断。母体外周血中的胎儿游离DNA含量在5%-30%之间,且孕周越大外周血中胎儿DNA的含量越高。另唐氏胎儿改变了21号染色体来源的游离DNA在孕母血浆中的相对含量,而这种含量的细微变化可被高通量测序技术精确检测。目前比较成熟的是无创DNA二代高通量测序技术,而我国尚未广泛应用。本研究旨在建立无创性唐氏综合征的筛查模型及评分系统,同时探索无创DNA检测技术在高龄孕妇唐氏综合征筛查中的价值。本课题共分为二部分：一、无创性唐氏综合征的筛查模型及评分系统的建立。二、无创DNA二代高通量检测技术在高龄孕妇唐氏综合征筛查中价值的探索。第一部分：高龄孕妇无创性唐氏综合征的筛查模型及评分系统的建立目的：建立高龄孕妇无创性唐氏综合征的筛查模型及评分系统。希望在高龄孕妇中通过应用此筛查模型及评分系统,在提高筛查准确性的同时,极大减少羊水穿刺的几率。方法：回顾性分析2009年1月至2014年1月期间在我院建卡产检并分娩且病历资料及随访结果完整的高龄孕妇(分娩年龄≥35周岁)1192例,其中唐氏患儿6例。记录1192例高龄孕妇年龄、有无不良孕产史、有无孕早期药物等不良因素暴露史、孕早期PAPP-A(妊娠相关的血浆蛋白A)和β-HCG(游离人绒毛膜促性腺激素β-亚单位)检测加超声测定NT(颈项透明层厚度)、孕中期唐氏三联血清学筛查及孕中期遗传学超声检查结果并将其纳入评分项目,按照我院的筛查标准登记其详细的回访信息及妊娠结局；然后根据1192例高龄孕妇的统计结果,通过logistic单因素及多因素回归分析得出对高龄孕妇唐氏阳性有影响的因素,据此建立高龄孕妇无创性唐氏综合征产前筛查模型及评分系统。应用受试者工作特征曲线(ROC曲线)及其曲线下面积(AUC)显示自建模型预测唐氏风险的准确性。结果：1.唐氏阴性组与唐氏阳性组对比,孕妇年龄、孕早期药物等不良因素暴露史、胎儿侧脑室增宽、NF(颈项软组织厚度)增厚、股骨短小、肱骨短小、心脏畸形与唐氏阳性结果有明显相关性,差异有统计学意义(p<0.05)；2.对1192例高龄孕妇进行单因素及多因素logistic回归分析,筛选出7个对唐氏疾病预测有意义的指标：孕妇年龄、孕早期药物等不良因素暴露史、胎儿侧脑室增宽、NF增厚、股骨短小、肱骨短小、心脏畸形；3.自建模型：Logit(P)=-24.595+0.474×年龄+3.045×孕早期药物等不良因素暴露史+2.864×胎儿侧脑室增宽+1.081×NF增厚+2.823×股骨短小-0.602×肱骨短小+3.654×心脏畸形。4.自建模型对高龄孕妇唐氏风险预测的AUC达到了0.8以上,显示出自建模型对高龄孕妇唐氏风险预测有较好价值。结论：自建模型能较好的预测高龄孕妇唐氏风险。第二部分：无创DNA二代高通量检测技术在高龄孕妇唐氏综合征筛查中价值的探索目的：探索无创DNA检测技术在高龄孕妇唐氏综合征筛查中的价值,为产前筛查唐氏综合征提供重要补充。方法：在妊娠12周之后一次性采集8ml外周血。采用双盲试验设计,实验室只记录样本号,血样送北京贝瑞和康生物技术有限公司采用12-plex高通量Hiseq2000平台进行检测。所有样本均有建卡或详尽临床资料并随访至分娩。有羊水穿刺染色体检查的以羊水中胎儿核型分析作为诊断唐氏综合征的金标准；无羊水穿刺染色体检查的以分娩结局(新生儿科医生的检查结果)作为唐氏综合征诊断标准。统计分析无创DNA检测技术在本研究中的灵敏度、特异度等指标。结果：共收集87例高龄孕妇,其中5例染色体数目异常(3例21三体、1例18三体、1例47,XXX)均被准确诊断。结论：本研究显示无创DNA检测高龄孕妇21三体准确性及特异性均达到100%,证明其是高龄孕妇唐氏综合征筛查的一个新型手段,并有望成为高龄孕妇唐氏综合征筛查的一线选择。