PLGA纳米纤维支架缓释pbFGF和pBMP-2促进牙周膜细胞增殖和分化的体外研究

来源 :中国医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ahaqwjtyl
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目的:利用组织工程技术制备聚乳酸-羟基乙酸共聚物(poly(lactic-co-glycolic acid),PLGA)纳米纤维支架携带碱性成纤维细胞生长因子质粒(plasmid basic fibroblast growth factor,pbFGF)和骨形态发生蛋白-2质粒(plasmid bone morphogenetic protein,pBMP-2),转染牙周膜细胞分泌bFGF和BMP-2,观察其对人牙周膜细胞增殖和分化的作用,为实现全脱出牙齿再植后牙周膜愈合奠定实验基础。研究方法:采用静电纺丝法制备PLGA纤维支架和pbFGF/pBMP-2-PLGA复合纤维支架,通过扫描电镜和透射电镜对支架材料的表面形貌进行表征。分离阻生第三磨牙或因正畸拔除前磨牙进行人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,hPDLCs)原代培养,取第3-5代hPDLCs接种于支架材料表面。以PLGA纤维支架为对照,通过共聚焦荧光显微镜观察复合纤维支架对细胞的粘附作用;MTT法检测复合纤维支架对细胞增殖作用的影响;qRT-PCR检测复合纤维支架对细胞成纤维分化相关基因(SCX、Col-I)和成骨分化相关基因(Runx-2、ALP)的影响。实验结果用SPSS17.0软件包进行分析,两样本均数比较用两独立样本t检验,P<0.05为差异具有统计学意义。结果:扫描电镜下可见PLGA纤维支架和pbFGF/pBMP-2-PLGA复合纤维支架纤维均一光滑,无串珠及纺锤体结构。PLGA纤维支架纤维平均直径417.21±70.68 nm,pbFGF/pBMP-2-PLGA复合纤维支架纤维平均直径263.96±41.44 nm。基因缓释结果显示:21天时pbFGF和pBMP-2的总释放量为128 ng。共聚焦荧光显微镜观察到两种支架材料均利于hPDLCs的粘附和生长。MTT结果显示复合纤维支架在第7天明显促进细胞的增殖(P<0.05)。同时,qRT-PCR显示复合纤维支架组的SCX,Col-I,Runx-2,ALP基因表达高于PLGA纤维支架组(P<0.05)。结论:pbFGF/pBMP-2-PLGA复合纤维支架可以促进hPDLCs的增殖,且成骨/成纤维分化能力优于PLGA纤维支架组,具有促进牙周组织再生的潜能。
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