泄浊解毒、活血通络方对糖尿病肾病大鼠肾脏的治疗作用及对肾组织Nephrin mRNA表达的影响

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目的:本研究通过高糖高脂饲料加小剂量链脲佐菌素(STZ)的方法建立糖尿病肾病(DN)大鼠模型,并应用泄浊解毒、活血通络方对模型进行干预性治疗,通过观察大鼠24小时尿蛋白定量、血清总白蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、糖化血红蛋白(HbA1c)、胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)等生化指标以及肾组织Nephrin mRNA的表达,探讨泄浊解毒、活血通络方对糖尿病肾病的治疗作用及可能机制,从而为临床治疗糖尿病肾病提供实验基础和理论依据。方法:选用清洁级健康雄性SD大鼠85只,普通饲料适应性喂养一周,测尿蛋白和血糖均阴性,然后随机取出15只为正常组对照,其余70只给予高糖高脂饲料喂养。12周后给予腹腔注射STZ35mg/kg,正常组给予相应体积的枸橼酸缓冲液腹腔注射。72h后测血糖,随机血糖≥16.7mmol/L视为糖尿病造模成功。造模成功的大鼠随机分为四组,分别为:模型组(MG)、中药治疗组(ZYG)、西药治疗组(XYG)、中药+西药治疗组(JYG),除模型组外,各治疗组分别给予相应的药物灌胃,每日1次,正常组和模型组予相应的生理盐水,每日灌胃1次,共16周。于给药后第4周(4W)、8W、12W末大鼠尾静脉取血测血糖,留24小时尿用尿蛋白试纸检测尿蛋白。治疗16周以后,留24小时尿,记录尿量,离心尿液取上清液留用24小时尿蛋白定量的测定,使用水合氯醛麻醉大鼠,腹主动脉取血,离心取大鼠血清,测量大鼠血清的血清TP、ALB、Scr、BUN、TG、TC等生化指标,摘取右肾并称重量,取肾脏组织用于光镜、电镜、免疫组化和Real-time PCR的观察。结果:1实验大鼠一般情况的比较正常大鼠饮食正常,尿量正常,肌肉丰满,毛发有光泽,精神良好,反应灵敏。模型组大鼠均出现多饮、多食、多尿、身体消瘦,毛发脱落,行动迟缓等症状,部分大鼠随时间的推移出现半身不遂、白内障等;各治疗组大鼠的症状都出现不同程度的缓解。造模后大鼠死亡2只,1只血糖未达标剔除。在给药过程中,模型组死亡4只,中药组死亡1只,2只血糖自愈剔除,西药组死亡2只,1只血糖自愈剔除,中药加西药联合治疗组1只血糖自愈剔除。2各组间大鼠体重,右肾重,肥大指数(肥大指数=右肾重/体重)的比较模型组和各治疗组的体重与正常组相比均减轻(P<0.05);模型组和各治疗组间相比无差别(P>0.05)。正常组、模型组、治疗组相比较,大鼠右肾重无明显差异(P>0.05)。模型组和各治疗组的肥大指数与正常组相比均升高(P<0.05);各治疗组和模型组相比无差别(P>0.05)。324小时尿蛋白定量的比较与正常组比较,各治疗组和模型组24小时尿蛋白定量显著升高(P<0.05);与模型组比,各治疗组明显降低(P<0.05);与中药+西药组相比,中药组、西药组升高(P<0.05);中药组和西药组相比无明显统计学意义(P>0.05)。4各组间糖化血红蛋白的比较与正常组相比,各治疗组和模型组的糖化血红蛋白均升高(P<0.05);与中药+西药组、中药组相比,西药组和模型组均升高(P<0.05);中药组与中药+西药组相比无明显差异(P>0.05);西药组与模型组相比无明显差异(P>0.05)。5各生化指标的比较各治疗组和模型组的TP、ALB与正常组相比均降低(P<0.05),而TG、TC明显升高(P<0.05);各治疗组的TP、ALB与模型组比明显升高(P<0.05),而TG、TC明显降低(P<0.05);与中药+西药组相比,中药组和西药组的TP、ALB降低(P<0.05),TG、TC升高(P<0.05);中药组和西药组相比TP、ALB、TG、TC无明显统计学意义(P>0.05)。正常组、模型组、各治疗组的Scr、BUN相比较无明显差异(P>0.05)。6肾脏组织病理形态的观察6.1光镜下的观察显示:正常组大鼠的肾脏组织结构正常,肾小球结构完整,未见到肾小球的肥大,肾小球毛细血管基底膜未见增厚,系膜细胞和其基质无明显改变。模型组大鼠可见肾小球肥大,肾小球毛细血管基底膜增厚。各治疗组肾小球均有不同程度的病理改变。6.2电镜下的观察显示:正常组大鼠的肾脏组织结构正常,肾小球的基底膜均匀无增厚,足突均匀分布,模型组可见肾小球毛细血管基底膜增厚,部分增生,足突广泛融合。各治疗组的毛细血管基底膜出现不同程度的增厚,足突部分融合。6.3免疫组化染色法检测肾组织Nephrin的表达:Nephrin在正常组、各治疗组均有表达,表达部位为肾小球足细胞裂孔膜处,模型组表达不明显。与正常组相比,各造模组中的Nephrin表达明显减少(P<0.05);与模型组相比,各治疗组中的Nephrin表达较强(P<0.05);各治疗组之间相比,中药+西药组的表达最强(P<0.05);中药组和西药组均有表达,两组相比无明显统计学意义(P>0.05)。7肾组织中Nephrin mRNA的表达情况统计学分析结果显示:与正常组相比较,模型组、中药+西药组、中药组、西药组大鼠肾组织中Nephrin mRNA的表达减弱(P<0.05);与模型组相比,中药+西药组、中药组、西药组大鼠肾组织中Nephrin mRNA的表达上调(P<0.05);与中药+西药组相比,中药组和西药组大鼠组织中NephrinmRNA的表达下调(P<0.05);中药组、西药组相比较(P>0.05)无统计学意义。结论:1泄浊解毒、活血通络方中药可降低糖尿病肾病大鼠24小时尿蛋白定量,升高血清中的TP、ALB,降低TG、TC,降低糖化血红蛋白,改善糖尿病肾病大鼠肾脏病理损害,延缓糖尿病肾病的进展。2泄浊解毒、活血通络方能够上调Nephrin的表达,保护肾小球足细胞,延缓糖尿病肾病的进展。3综合分析,中药与西药联合治疗糖尿病肾病效果更佳。
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