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目的：抑癌基因p53在调控肿瘤细胞对化疗药物诱导的DNA损伤的反应中发挥重要作用,p53的凋亡刺激蛋白(apoptosis stimulating protein of p53, ASPP)家族是p53促凋亡功能的调节蛋白,其中ASPP1和ASPP2与p53结合后可增强该蛋白促进细胞凋亡的功能,发挥抑制肿瘤的作用,而iASPP却恰恰相反,它与p53结合后具有癌基因的功能。癌蛋白Hdm2E3通过泛素-蛋白酶体途径使p53泛素化,引起p53的快速降解,导致p53信号系统功能降低。本研究用抑制剂Hdm2 E31igase inhibitor阻断蛋白酶体介导的降解对非小细胞肺癌细胞系A549(P53野生型)和NCI-157(P53突变型)ASPP家族表达的调节,探讨ASPP家族蛋白表达状态在调控肿瘤细胞的化疗反应性,特别是DNA损伤性化疗药物诱导的细胞凋亡过程中的作用。方法：MTT法筛选3种药物(顺铂,CDDP;吡柔比星,THP；蛋白酶体抑制剂,Hdm2 E31igase inhibitor)以及联合用药(顺铂+蛋白酶体抑制剂；吡柔比星+蛋白酶体抑制剂)的最小有效浓度,初步检测各药物对A549和NCI-157细胞的生长抑制情况；用MTT法筛选出的最小有效浓度处理两种细胞,Western blot单独用药及联合用药处理24小时后,ASPP蛋白家族的表达情况：单独用药及联合用药处理24小时后,免疫沉淀法检测JNK/SAPK活性。实验数据用SPSS统计软件处理,均数比较用方差分析(ANOVA), P<0.05认为有统计学意义。结果：(1) Hdm2 E31igase inhibitor的增殖抑制活性各处理组MTT检测结果显示：CDDP和THP对两株细胞的生长具有抑制作用,但Hdm2E3对两类细胞的生长抑制作用无显著意义(p>0.01),细胞增殖抑制率低于11%,Hdm2E3抑制剂联合CDDP或THP对A549和NCI-157的生长抑制作用也不明显(p>0.05)。(2) Hdm2 E31igase inhibitor对ASPP家族蛋白表达的影响Western Blot结果显示：上述药物处理24小时后,与各自的对照组相比,两株细胞ASPP1及ASSP2的表达均有不同程度的上调。在A549细胞ASPP1由对照组的0.760±0.80增加到0.887±0.970,ASPP2由对照组的0.544±0.67增加到0.968±0.654；在NCI-157细胞ASPP1由对照组的0.157±0.05增加到0.334±0.133,ASPP2由对照组的0.239±0.09增加到0.391±0.091。药物处理后iASSP的表达变化则不同：NCI-157细胞iASSP的相对表达量增加,分别为1.459±0.9和1.188±0.755。A549细胞iASPP的相对表达量下降,分别为0.55±0.211和1.227±0.32。(3) Hdm2 E31igase inhibitor对CDDP处理的A549细胞JNK/SPAK活性的影响免疫沉淀结果显示：A549细胞经CDDP及CDDP+Hdm2 E31igase inhibitor处理24小时后,可激活A549细胞中JNK/SPAK活性,磷酸化的c-Jun表达更高。此外,正常的A549细胞中的JNK/SPAK具有一定的基础活性。结论：蛋白酶体抑制剂Hdm2 E3 ligase inhibitor能够增加ASPP1和ASPP2的表达量,但增加表达突变型p53的NCI-157细胞的iASPP表达,降低表达野生型的p53的A549细胞的iASPP表达。本实验所用剂量对A549和NCI-157的细胞增殖无抑制作用,能够增强CDDP处理的A549细胞的JNK活性。