【摘 要】
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Tβ16作为胸腺素β家族成员之一,可通过抗感染和免疫调节作用、刺激成纤维细胞的增殖、促进上皮细胞角化、刺激内皮细胞移动以及促进血管形成等作用来促进创伤修复。本课题应
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Tβ16作为胸腺素β家族成员之一,可通过抗感染和免疫调节作用、刺激成纤维细胞的增殖、促进上皮细胞角化、刺激内皮细胞移动以及促进血管形成等作用来促进创伤修复。本课题应用基因工程重组技术,设计构建含SUMO-Tβ16融合基因的重组质粒SUMO-Tβ16/pET3c,将该质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)中,经克隆筛选获得了两株DNA测序完全正确的重组工程菌SUMO-Tβ16/pET3c/BL21。该工程菌连续传代100代,经各项指标检测,遗传稳定性很好。重组SUMO-Tβ16融合工程菌,经0.8mmol/L的IPTG诱导,30℃培养6h后,SDS-PAGE电泳显示为可溶性表达。通过DEAE阴离子交换层析→疏水层析→SUMO蛋白酶(Ulp1)剪切→凝胶过滤层析→获得纯度大于95%、比活性为5.3×105IU/mg的Tβ16。体内外生物学活性实验证明:Tβ16具有促进成纤维细胞增殖;促进兔角膜细胞增殖;促进鸡胚绒毛膜尿囊膜的血管增殖;Tβ16凝胶能够促进家兔皮肤烫伤和碱烧伤的愈合。总之,本课题研究结果表明Tβ16可以通过抗感染、促进成纤维细胞增殖和促进血管的再生等作用对创伤进行修复,初步确定Tβ16有效剂量为5~10μg/克,研究结果为Tβ16药物的开发提供实验依据。
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