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背景和目的:内毒素(endotoxin)存在于革兰氏阴性菌的细胞壁,为脂多糖的复合体(lipopolysaccharides,LPS),是革兰氏阴性菌的主要致病成分,细菌的内毒素可以引起内毒素血症。肝硬化患者易并发内毒素血症,而且血液中内毒素水平与肝功能损害程度有关。细菌感染或内毒素所致的炎症反应严重程度与肝硬化病人的天然免疫有关,天然免疫为机体抵御外界病原体的第一道防线。最近有资料显示哺乳动物Toll样受体(toll-like receptors,TLR)参与了由内毒素或其他病原体诱导的细胞内信号转导,其中最关键的是TLR2和TLR4分子。在先天性免疫中,TLR被看作是触发抗微生物反应的关键成分。因此,本研究的目的在于:1)检测乙肝肝硬化患者外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PMBC)TLR2和TLR4 mRNA的表达;2)探索TLR2/TLR4 mRNA表达与血清内毒素及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosisfactor-α,TNF-α)的关系,阐明TLR2/TLR4在乙肝肝硬化内毒素血症中的作用。方法:入选的29例乙肝肝硬化病人均符合2001年病毒性肝炎和肝硬化的诊断标准。除外以下情况:(1)近6周内使用过免疫调节药物;(2)肾功能不全(肌苷＞120 umol/L):(3)合并肿瘤患者;(4)无饮酒史(每日饮酒量少于20g);(5) 6周内无明确感染的或使用抗生素者。肝功能损害程度以Child-Pugh为分级标准。按性别和年龄匹配选择无肝炎病史的健康志愿者10例为正常对照,要求肝功能检测正常,无饮酒史。抽取患者外周静脉血7 ml,其中5 ml留置在经脱酶处理的抗凝管内,采用淋巴细胞分离液(Ficoll)分离得到单个核细胞;采用RT-PCR半定量分析TLR2和TLR4 mRNA水平;另外2ml留置在无内毒素的试管内分离血清,分离的血清储存在-70℃的冰箱里,用鲎试剂定量测定血清内毒素水平和采用放免法测定血清中TNF-α水平。结果:(1)血清内毒素水平和血清TNF-α水平的变化:与正常对照比较,肝硬化患者血清内毒素水平(分别为0.050EU/ml和0.107EU/ml P＜0.05)和血清TNF-α水平(分别为:1.282pg/ml和2.076pg/ml,P＜0.05)均明显升高;(2)外周血单个核细胞中TLR2和TLR4 mRNA受体的表达:与正常对照比较,肝硬化患者外周血单个核细胞中TLR2的表达明显升高(分别为:0.651和0.923,P＜0.05),且与血清内毒素和TNF-α升高水平呈正相关(r=0.573),而TLR4的表达下调,但差异无统计学意义。结论:在乙肝肝硬化患者(主要是Child-Pugh B级、Child-Pugh C级)PMBCs的TLR2 mRNA表达水平上调,且与TNF-α的水平呈正相关,但TLR4 mRNA的水平没有变化,表明在肝硬化患者中存在内毒素抵抗现象,可能同时存在革兰氏阳性菌移位通过TLR2介导细胞因子的释放。