非整倍体是指染色体组中有个别染色体缺失或增加的类型。与高等动物不同，贝类能够耐受个别染色体数目的增减而存活。本研究中，我们通过二倍体和三倍体杂交的手段，人工制备并筛选了长牡蛎非整倍体，利用荧光原位杂交（FISH）技术和同工酶方法对非整倍体进行了鉴定，探讨了各种类型非整倍体的发生频率、存活能力和生长状况，并从生物能量学角度对生长差异进行了分析。结果如下：1、在 1 龄和 4 龄时对二倍体、三倍体杂交组长牡蛎进行了染色体计数，发现两 杂交组产生非整倍体的频率不同： （1） DTA 组（2n♀×3n♂）产生了较高比例的非整倍体。1 龄时占 82.5%， 4 龄时占 83.7%。其中 1 龄时 2n 水平的非整倍体占 75%，3n 水平的占 7.5%；4 龄时 2n 水平的占 81.6%，3n 水平的占 2.1%。除了非整倍体 外，还发现了一定比例的二倍体，1 龄时为 17.5%，4 龄时为 16.4%。 未发现三倍体。 （2） TDA 组（3n♀×2n♂）产生了较多的整倍体（88.1%）和少量非整倍 体（11.9%），4 龄时该比例变化不大。在整倍体中，三倍体的比例有 所增加（从 1 龄的 30.9%到 4 龄的 41.1%），二倍体的比例略有下降（从 1 龄的 57.2%到 4 龄的 47.1%）。 从以上结果可以看出，二倍体、三倍体杂交是进行贝类非整倍体制备的 有效手段。在牡蛎中，三倍体父本和母本产生非整倍体子代的比例不同，雄 性三倍体产生了较多的非整倍体后代。2、本研究共发现 2n+1、2n+2、2n+3、3n-2 和 3n-1 五种类型的长牡蛎非整倍体， 其中 2n+2 和 2n+3 两种类型为首次报道。染色体数为 24-27 的个体可能不能 存活。在 1 龄时发现的 2n+3 和 3n-2 两种类型在 4 龄时未发现，并且 2n+2 类 型非整倍体的比例有所下降。可能是个体死亡或发生了染色体丢失。但作为 一个整体，非整倍体的存活能力与整倍体接近。 - 1 -<WP=6>巩宁 牡蛎非整倍体的制备及其生物学特性研究 中国科学院研究生院博士学位论文3、利用 rDNA 的 ITS1、ITS2 序列作引物，PCR 扩增的方法制备了长牡蛎 10 号 染色体的特异性探针，对长牡蛎的三体 10 进行了荧光原位杂交（Fluorescence in situ hybridization，FISH）鉴定。FISH 方法是进行非整倍体鉴定的有效手段。同 时采用淀粉凝胶和聚丙烯酰胺凝胶电泳，对长牡蛎非整倍体进行了 8 种同工 酶的分析。其中，苹果酸脱氢酶（MDH）的一个位点上，两个非整倍体个体 （三体和双三体）出现了预期的酶谱。该结果对非整倍体的鉴定及利用非整 倍体进行酶基因的染色体定位打下了基础。4、对人工制备的长牡蛎非整倍体进行了生长研究。在一龄和四龄时，染色体数 目对长牡蛎生长的影响均极其显著。一龄时，三倍体的全湿重在比二倍体大 64.7%；四龄时，三倍体的全湿重在比二倍体大 79%，软体部湿重大 98%。 作为一个整体，非整倍体的各个生长参数均小于二倍体和三倍体。2n+2 型非 整倍体小于其它类型。三体之间的生长差异较大，说明不同染色体的增加对 生长的影响程度不同。对长牡蛎的二倍体、三倍体和非整倍体进行了能量学 研究。三倍体用于生长的能量大于二倍体和非整倍体，二倍体的生长能大于 非整倍体。非整倍体与二倍体能量利用上的差异可能是二者生长差异的原因 之一。5、对养殖的长牡蛎、近江牡蛎进行了染色体计数。这两种牡蛎的二倍体染色体 数均为 20，但制片中都发现了数目不足 20 的非整倍体细胞。并且个体小的 牡蛎表现出了较高的细胞非整倍体率。经回归分析发现，全湿重与细胞非整 倍体率呈负相关，回归关系显著。