在人类社会飞速发展的时代,伴随的人口老龄化问题日益显现,人口老龄化所形成的社会问题不仅对全球,对我国造成的影响也越来越严峻,与之相关的神经退行性疾病对人们的影响日益显著。阿尔兹海默症是一类严重的神经退行性疾病,它的病理特征主要包括:淀粉样前体蛋白（β-amyloid,Aβ）的沉积、Tau蛋白为主要成分的神经纤维缠结、神经递质（例如乙酰胆碱）水平的严重下降、胶质细胞的过度活化和神经元细胞炎症、神经细胞死亡等。神经细胞炎症造成的细胞死亡是AD在细胞水平上的重要病理特征。因此,调节炎症反应和降低细胞死亡可能成为缓解或治疗AD的途径。G蛋白偶联受体（G protein-coupled receptors,GPCRs）是人类最大的细胞表面受体家族,介导了复杂的细胞间的信号传递,并由此参与了广泛的生理活动。中枢系统分布了大量的GPCRs,其中五羟色胺受体（5-hydroxytryptamine receptors,简称5-HTR,也称血清素受体,serotonin receptors）因其重要的神经调节功能而成为最主要的药物靶标之一。体内和体外研究也表明了5-HTR在调节神经细胞炎症和细胞活力过程中具有重要作用,调控5-HTR可能成为AD相关治疗的新途径。5-HTR家族目前发现有14个亚型,其中5-HT1B在调控睡眠和神经细胞兴奋方面的研究比较广泛。我们前期研究同时发现,激活的5-HT1B具有在抑制炎症反应和提高神经细胞活力的作用,可以作为筛选具有神经保护功能药物的靶标。具有益智安神作用的中药及有效成分长久以来都是药物研究的重要部分。但是这些中药和其中的活性成分究竟通过什么靶点如何发挥作用的?其机制并不清楚,这也成为中药现代化发展中的局限。本研究通过在5-HT1B本研究在前期工作的基础上,发现大黄酚可能通过5-HT1B在调控睡眠、炎症反应和神经细胞活力方面发挥重要作用,可能具有抵抗炎症反应和神经细胞死亡等神经保护作用,可能成为缓解或治疗神经退行性疾病的潜在药物。本研究也可以为中药活性成分在细胞水平和分子水平的作用机制提供基础数据。本论文主要研究结果如下:1.以5-HT1B、MT1、MT2、OX1、OX2为靶点,对17种中药活性小分子进行筛选,发现大黄酚、大黄化合物2可通过5-HT1B激活ERK通路,天麻不同的化合物也可通过MT1、MT2激活ERK通路,使其磷酸化。2.针对大黄酚的药物靶点可能是5-HT1B,本研究通过酶切法、分子对接、荧光共振能量转移技术进一步对大黄酚的药物靶点进行验证。酶切法结果说明大黄酚能与5-HT1B结合,从而保护复合体被酶切的作用减弱;分子对接结果说明大黄酚能与5-HT1B结合,5-HT1B与大黄酚的结合能微弱于阳性药物;荧光共振能量转移技术中的5-HT1B-Flash-turquiose稳定株已经构建完成,后续实验还需补充。3.研究想利用5-HT1B纯化蛋白进行后续实验,构建p ET28a-5HT1B载体,但体外表达未成功。5HT1B是一种膜蛋白,体外表达会受多种因素影响其稳定性,之后会多借鉴其他学者的实验经验,完善本实验。4.在前期实验的基础上,还进行了天麻粉改善小鼠睡眠实验的补充探究,除之前发现的天麻粉改善小鼠睡眠之外,结果还发现天麻显著提高了小鼠中枢5-HT1B、5-HT6、MT1、MT2受体的表达,且上调幅度显著高于艾司唑仑,侧面说明睡眠效果可能通过以上受体发挥作用;另外实验结果还发现天麻可能会对肝脏、肾脏造成一定程度的损伤。5.研究还构建了四个EGFR分子探针,以利用荧光共振能量转移技术对EGFR的分子构象进行探究。