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原发性肝癌居肿瘤相关死因的第三位,其中90%以上的病例为肝细胞癌。多项研究表明胆固醇代谢在肿瘤发生发展中具有重要作用,使用他汀抑制肿瘤细胞中胆固醇的合成对肿瘤的发生发展有显著抑制作用。由于他汀的靶点]HMGCR位于胆固醇合成上游位置,其在抑制胆固醇合成的同时,对其他终产物也存在抑制作用。因此,他汀的副作用亦不可忽视,从胆固醇合成通路的下游寻找新的治疗靶点尤为重要。鲨烯环氧化酶(SQLE)位于胆固醇合成的下游。已有研究表明SQLE在乳腺癌、胰腺癌、直结肠癌等肿瘤中的表达发生异常。但是SQLE在肝细胞癌中的表达模式、相关功能及分子机制不明。为了揭示SQLE在肝癌组织中的表达模式,借助于荧光定量PCR、免疫组化和Western Blot技术,我们检测了肝癌组织及配对的正常组织中SQLE的mRNA水平和蛋白水平。实验结果显示,与配对的正常组织相比,SQLE在肝癌组织中的表达水平呈现上调趋势。SQLE在肝细胞和肿瘤细胞中的表达水平与肿瘤细胞的恶性程度有一定相关性。这提示SQLE的表达很可能参与了肝癌的发生发展。上调SQLE的表达促进肝癌细胞生长、迁移及其在软琼脂上的克隆形成能力。在肝癌细胞中下调SQLE的表达抑制肿瘤细胞生长、迁移及其在软琼脂上的克隆形成能力。而且,沉默SQLE在肝癌细胞中的表达抑制肿瘤细胞在裸鼠体内的转移能力。进一步的机制研究显示,SQLE过表达激活Ras-ERK信号,上调ERK的磷酸化水平。综上所述,SQLE通过激活Ras-ERK信号从而促进肝癌细胞的恶性行为。我们的研究可以分为如下两个部分。第一章SQLE在肝癌组织和细胞中表达上调研究目的：研究肝癌组织及配对的正常组织、正常肝细胞及肝癌细胞株中SQLE的蛋白水平和mRNA水平,确定SQLE在肝癌中的表达模式。研究方法：利用荧光定量PCR检测SQLE在40例肝癌组织及配对的正常组织中的表达；随机挑取6例肝癌组织及配对的正常组织,利用Western Blot检测SQLE的蛋白水平,对荧光定量PCR的结果进行验证,从中挑取1例肝癌组织及配对的正常组织,利用免疫组化染色检测SQLE的蛋白水平,进一步确定荧光定量PCR的结果；利用Western Blot检测SQLE在正常肝细胞和肝癌细胞中的表达。研究结果：与配对的正常组织相比,SQLE的mRNA水平在肝癌组织中上调；免疫组化染色和Western Blot结果显示,SQLE蛋白水平在肝癌组织中升高,进一步验证了荧光定量PCR的结果；SQLE的表达与细胞株的恶性程度相关,在正常肝细胞株中SQLE的表达水平较低,在肝癌细胞株中SQLE的表达水平较高。结论：SQLE在肝癌组织和肝癌细胞中表达水平上调。这提示SQLE很可能在肝癌发生发展过程中起着重要作用。第二章SQLE对肝癌细胞恶性行为及ERK信号的影响研究目的：研究SQLE的表达对肝癌细胞生长、迁移、非锚定性克隆集落和体内转移能力的影响,揭示SQLE在肝癌中的功能。研究方法：构建SQLE表达载体,利用脂质体转染在肝癌细胞HepG2、 7404中过表达SQLE;以结晶紫法检测SQLE表达上调对肝癌细胞生长的影响;以软琼脂集落法研究过表达SQLE对肝癌细胞非锚定性生长能力的影响；以Boyden Chamber细胞迁移模型检测过表达SQLE对肝癌细胞体外迁移能力的影响。同时,构建RNA干扰的病毒载体,在肝癌细胞HepG2、 MHCC97中沉默SQLE的表达；以结晶紫法检测SQLE表达下调对肝癌细胞生长的影响；以软琼脂集落法检测SQLE下调后肝癌细胞克隆形成的变化；以Boyden Chamber细胞迁移模型检测下调SQLE的表达对肝癌细胞迁移能力的影响；利用心脏注射,结合小动物体内成像平台,检测SQLE表达下调对肝癌细胞体内转移能力的影响。在上述实验的同时,检测SQLE的表达对ERK磷酸化水平的影响。研究结果：通过脂质体转染和G418抗性筛选,在肝癌细胞HepG2和7404中建立了过表达SQLE的稳定表达细胞株。通过结晶紫实验、Boyden Chamber实验和软琼脂集落实验,我们发现过表达SQLE促进肝癌细胞HepG2和7404的生长、迁移和在软琼脂上的非锚定性生长的能力。同时,通过成功构建了SQLE RNA干扰的慢病毒载体,在肝癌细胞HepG2、 MHCC97中干扰SQLE的表达。通过结晶紫实验、Boyden Chamber实验和软琼脂集落实验,我们发现下调SQLE的表达抑制肝癌细胞HepG2和MHCC97的生长、迁移和在软琼脂上的非锚定性生长的能力。体内实验表明,干扰SQLE在HepG2中的表达抑制肝癌细胞在裸鼠体内的迁移能力。另一方面,SQLE在肝癌细胞中的表达显著上调ERK的磷酸化水平,干扰SQLE的表达抑制ERK的磷酸化。并且,干扰ERK的表达解除了SQLE对肝癌细胞生长的促进作用。结论：SQLE在肝癌细胞中的表达促进肝癌细胞生长、迁移、克隆形成和体内转移,SQLE通过活化ERK信号通路对肝癌的发生发展起重要的促进作用。